全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)PPT.ppt

2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告 HIV抗体检测 筛查方法 （1）酶联免疫吸附试验（ELISA） 可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。 （2）化学发光或免疫荧光试验 HIV抗体检测 （3）快速检测（RT）及其它检测试验 这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10～30分钟内得出结果。 快速检测（RT）及其它检测 试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测，尤其是基层单位。 快速试剂的局限性 一般不用于血液筛查 有一定的假阳性反应，如作为临床诊断，要复检和确认 有一定的假阴性反应（尤其暴露时间3个月） 快速检测（RT）及其它检测 明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。 HIV抗体检测 免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。 免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。 HIV抗体检测 筛查程序 （1）初筛试验 根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；(如果标本的OD值略低于CUT-OFF值时（CO-10﹪ODCO）判定时需小心) ；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。 HIV抗体检测 （2）复检试验 对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。 艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。 HIV抗体检测 （3）初筛和复检流程 样品 初筛试验 筛查试剂 阳性反应 阴性反应 复检试验 原有试剂 + 另一不同原理 （ 或厂家 ） 试剂或另外两种 不同原理 （ 或厂家 ） 试剂 均阳性反应 一阴一阳 均阴性反应 确证试验 报告阴性 HIV 抗体筛查检测流程 HIV抗体检测 注意事项 不要使用过期试剂(优先使用效期短的试剂)；超过有效期的试剂灵敏度明显下降，超过时间越长下降越明显。 在同一次试验中不同批次试剂不得混用； 使用试剂前放置30分钟平衡至室温；试剂存放：试剂在室温放置24小时后灵敏度开始下降，放置时间越长、室温温度越高灵敏度下降越明显； 仔细操作，避免污染； 加热、紫外线、强酸和强碱改变结合物酶活性； 不要让任何金属因素接触到酶结合物或底物溶液； 使用完全清洗和去离子水漂净的玻璃/塑料器皿，最好是一次性的； HIV抗体检测 实验过程中任何一步缩短时间灵敏度都明显下降，如果同时缩短每一步反应时间灵敏度下降更显著 洗板后和加样前，不要使板孔暴露在空气中时间过久，避免酶标板变干。未用完的酶标板需密闭于原铝箔袋内，防止受潮且保存于2-8℃冰箱内； 尽量保持前后孔温育时间一致，手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；全自动酶标仪也存在同样的问题，孵浴时间差距较大。标本较多时，请分批操作。 移液器应精确、经过校准； 严格按照说明书操作，计算临界值； HIV抗体检测 洗板是ELISA操作的重要环节，手洗条件一致性较差，对结果影响较大，全自动洗板机使用不当也会影响结果，血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针小孔处于阻塞状态，造成未结合标记酶洗脱不彻底，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。导致“花板”造成假阳性或假阴性； 洗