3显微镜计数 、死活细胞的鉴.ppt

一、实验目的 1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 2、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 实验1：微生物数量的测定 平板计数法； 比浊法（分光光度计）； 显微直接计数法 。 实验材料（1） 酵母菌悬液 载玻片 盖玻片 血球计数板 计数器 显微镜 酵母菌显微直接计数 方法：总菌计数法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板。 不要从高处往下滴！ 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 在40×镜下计数：计数5个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上25就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。每个记数室体积 为0.1立方毫米。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半 计数步骤： 注意事项： ①?从盖玻片与计数室缝隙间滴进样品液； ②?加样后静置3-5min，酵母菌均匀到一个水平上； ※ 浊度：a、每格5—10个菌体为宜； 　　　b、两个计数室计得的值来计算样品的含菌量。 计算： 通常数五个中方格的总菌数（A），然后求得每个中方格的平均值，再乘上25（25个中方格），就得出大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数，乘上稀释倍数（B），即原液中的总菌数。 总菌数（个/ml）=A/5×25×10000×B。 实验报告 1、结果记录在P92的表格： 各中格中菌数 A B 二室平均值 菌数/ml 1 2 3 4 5 第一室 第二室 实验2：酵母菌死活鉴定 死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 器材 （2） 1、染液：吕氏碱性美蓝染液 2、菌种：酿酒酵母液 3、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、盖玻片等 操作步骤2 美蓝浸片的观察：（斜面） 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生气泡影响观察。 3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。 美蓝浸片的观察：（斜面） 在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌菌液放在染液中，混合均匀。 思考题 根据你的实验体会，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？ 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？ 2、思考题： 培养基的制备与灭菌 下次实验