[生物学]第七章 植物基因工程的目的基因.pptVIP

第七章 植物基因工程的目的基因 第一节 抗植物虫害基因及其利用 第二节 抗植物病毒基因及其利用 第三节 抗植物真菌病害基因及其利用 第四节 抗非生物胁迫基因及其利用 第五节 改善作物品质的基因及其利用 第六节 雄性不育的基因及其利用 第一节 抗植物虫害基因 一、概述 据Oerke等（1994）统计全球粮食总产量每年因虫害造成的损失达14％。 如果作物不打农药可造成的产量损失：小麦52％、玉米59％、大豆58％、棉花84％。 我国统计结果，因虫害水稻每年减产10％、小麦减产20％、棉花减产30％以上。 1、利用化学农药的弊端 化学农药在食物中的残留，危机人类健康和造成严重环境污染； 化学农药对有益昆虫的毒害，危机多种生物资源，破坏生态平衡； 化学农药长期使用使病原体逐步产生抗性。 2、利用基因工程培育抗病虫品种的优点 抗性资源非常丰富； 抗性具有连续性和整体性； 育种周期短、成本低； 育成品种具有不污染环境及抗病虫害物质不易被环境因素所破坏； 二、Bt基因及其应用 1、 Bt基因的作用原理 苏云金杆菌产生的由一种或多种蛋白组成，具有高度特异性杀虫活性的蛋白。又称 －内毒素或杀虫结晶蛋白（IPC). IPC通常以原毒素形式存在，当昆虫取食IPC后，在昆虫的消化道内，原毒素被活化，活化的IPC能与昆虫肠道上皮细胞上面的特异性蛋白结合。结合以后的IPC全部或部分嵌合于细胞膜中，使细胞膜产生一些孔道，从而导致细胞由于渗透平衡被破坏而破裂。昆虫幼虫将停止进食，最终死亡。 2、IPC的分类 IPC划分为四种类型： 类型I：具有抗鳞翅目昆虫的活性； 类型II：抗鳞翅目和双翅目昆虫； 类型III：抗鞘翅目昆虫； 类型IV：抗双翅目昆虫。 3、Bt基因的简并性修饰 密码子均具有种的特异性或称种偏爱性； 高等植物种单、双子叶植物之间密码子的使用频率也有明显差异，这种密码子的偏爱性直接影响基因的转录水平和mRNA的稳定性； 未加改造的bt基因在转基因植物中表达水平很低，只占植株内全部可溶性蛋白的0.001%以下。通过改造，表达产物占细胞可溶性蛋白的0.03-0.1%才具较强的毒杀作用。 4、bt基因的应用 转基因bt植物可分为两代，即20世纪80年代称第一代；20世纪90年代称第二代； 第一代转bt基因植物 1987年，世界上4个研究小组获得了转bt基因的植物，其中三个是转化烟草植株，一个是转化番茄植株。 存在问题：IPC在植物中表达水平低，认为主要是mRNA不稳定和翻译效率低造成。 第二代转bt基因植物 特点： 1）转基因植物的种类增加； 2）bt基因植物中的表达水平大大提高；这 主要是通过对Bt基因进行修饰和使用新的启动子来实现的。 采用的启动子类型包括： CaMV35S组成型启动子； 玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶启动子； 玉米花粉特异性启动子； 1，5－二磷酸核酮糖羧化酶小亚基启动子。 5、Bt基因应用中存在问题及对策 存在的主要问题是： 昆虫可能对转bt基因植物产生抗性 对策： 1）使用组织专一性启动子或化学诱导启动子； 2）通过对bt基因进行修饰，使IPC在植物中高剂量表达； 3）遗传工程植株核非工程植株混种，以保证在繁育群体种保留一部分未经选择的害虫； 4）同时使用两种以上bt基因转化农作物或联合使用bt基因和其它类型的抗虫基因。 二、 蛋白酶抑制剂基因及其应用 蛋白酶抑制剂是一类蛋白质，在大多数植物的种子和块茎中，其含量可高达总蛋白的1－10％。 1、抗虫原理： 蛋白酶抑制剂与昆虫消化道内蛋白消化酶相结合，形成酶抑制剂复合物，阻断或减弱蛋白酶对外源蛋白质的水解作用，导致蛋白质不能被正常消化；酶抑制剂复合物能刺激昆虫过量分泌消化酶，使昆虫产生厌食；蛋白酶抑制剂可通过消化道进入昆虫淋巴系统，干扰昆虫的蜕皮过程和免疫功能，使昆虫不能正常发育。 2、蛋白酶抑制剂的分类 植物中存在三类蛋白酶抑制剂： 丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂，其中丝氨酸蛋白酶抑制剂与抗虫关系密切。 丝氨酸蛋白酶抑制剂有6个家族，其中豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpT1）和马铃薯蛋白酶抑制剂II（Pi－II)的抗虫效果最为理想。 巯基蛋白酶抑制剂对于利用巯基蛋白酶消化植物蛋白的昆虫有特殊抗性。目前，对水稻巯基蛋白酶抑制剂的研究日趋活跃，发现其对许多害虫的肠道消化酶具有明显的抑制作用。 3、蛋白酶抑制剂基因的应用 目前在植物抗虫基因工程中应用广泛且研究比较深入的蛋白酶抑制剂基因重要是：cpti基因、pi－II基因和水稻巯基蛋白酶抑制剂基因。 利用cpti基因转化烟草、水稻、油菜、白薯、苹果和杨树等，另外用pi－II和水稻巯基蛋白酶抑制剂基因转化烟草。 优点：蛋