植物载体表达构建演示文稿.pptVIP

植物表达载体构建; 载体 vector;质粒图谱及质粒构建 启动子 外源基因 终止子 启动子 报告基因 终止子 （标记基因） 目的片段 选择标记 载体;表达载体(expressing vector);;;;在植物表达载体;;Vir基因产物可诱导Ti质粒产生T-DNA区域的单链线性拷贝，在其他如VIR D2,VIR D4, VIR B等蛋白的协助下，穿越农杆菌及植物细胞的细胞壁、膜等，最后整合到染色体中。; 共整合载体 已很少用。外源基因首先克隆到一个克隆载体上，该载体含有一段与缺失T-DNA的Ti质粒有同源序列。当该载体进入土壤农杆菌后，与Ti质粒整合，然后由Ti质粒提供T-DNA向植物细胞转移的vir基因产物。;;病毒衍生载体 比较小，易侵染植物并大量扩增，可大量表达蛋白，但一般难于整合到植物基因组中。;;; 启动子 35S, Nos, others;启动子的种类;Constitutive promoter;CaMV 35S启动子;;Tissue specific promoter;;Inducible promoter;共同特点;三种类型;光诱导启动子;热诱导启动子;植物基因工程常用的报告基因; 作为报告基因的条件;报告基因;;Jellyfish Aequorea victoria: one of the oldest species on the earth ;;;Green Fluorescent Protein (GFP) ???????????????????????????????????????????????????????????????????????? This is a stereo view of GFP generated from the Brookhaven Database using R If you have the Chyou may follow the links to see GFP in action! Last updated (c) 1997 RWZELLER ;;;GUS酶的底物是无色的X-葡萄糖苷酸（X-glucuronide, X-gluc) GUS酶的显色反应以底物不同而不同： 5-bromo-4-chloro-3-indole-B-D-glucuronide 靛蓝 5-bromo-6-chloro-3-indole-B-D-glucuronide 橘红 4-methylumbelliferyl-B-D-glucuronide 荧光产物;检测方法;组织化学染色定位法;Figure 1 a) Mature cold stored potato tubers, transformed and control, stained for GUS activity. b) In vitro-grown microtubers, transformed and control, stained for GUS activity;;;;荧光素酶基因（LUC）;荧光素酶活性测定;氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因）;以 SB401 cDNA 为探针筛选马铃薯基因组文库 ;1、pGEM--7Z/SacI 2、pG701/SacI 3、?701/SacI 4、?DNA/H;pG701酶切电泳图;pG701酶切southern杂交; Restriction enzyme map of the insert fragment of pG701;转基因烟草萌发花粉的GFP观察;转基因烟草的冰冻切片的荧光显微镜观察;;启动子缺失片段与GUS相连构建双元载体;LAT52启动子与GUS相连构建双元载体;转GUS基因烟草抗性苗;转GUS基因烟草苗及植株;转基因烟草GUS组织化学染色（1）;萌发花粉的GUS 组织化学染色（2）;GUS基因GU;转基因烟草GUS酶活性检测;表达载体构建;1. 限制性内切酶 从商品目录上得到有关信息 GAATTC CTTAAG;;附录： 不同酶的反应缓冲液及活性 双酶切 酶切后具有共同的粘性末端： 5’-GATC: BamHI, MboI, Bgl II 5’CTAG: SpeI, Xba I, NheＩ 5’TCGA