微滴式数字PCR系统及其应用.PDF

微滴式数字PCR系统及其应用 Bio-Rad FAS 罗艳 2017-09-20 1 PCR技术的发展 1st 2nd 3rd Routine PCR Real-time PCR Digital PCR 定性检测 相对定量 绝对定量 2 QX200微滴式数字PCR系统 微滴分析仪 微滴发生器 Reagents Consumables Assays 3 微滴式数字PCR的技术原理 DNA或RNA分子 分配到不同的微滴 检测荧光信号值 配制反应体系 分配到不同微滴 微滴扩增检测 4 微滴式数字PCR的操作流程 5 微滴制备 将含有样品的预混液和油加入微滴发生卡的指定位置，并放入微滴 发生器内。 每个样品可生成20,000个微滴，8个样品大约需2.5分钟。 Droplets Sample 大小均一的微滴 Oil 6 微滴扩增 7 微滴检测 将PCR反应板直接放入微滴分析仪，自动对样品进行逐个分析，每个 微滴逐个通过检测器，每小时可完成32个样品的检测。 8 微滴检测结果 9 微滴式数字PCR的特点  绝对定量，不依赖Ct值，无需标准曲线  超高灵敏度，适用于稀有序列及稀有突变的检测  精准的定量结果和极佳的重复性 适用复杂样品检测，不易受PCR抑制物影响 兼容染料法和探针法，同时满足科学研究和临床检测要求 10 无需标准曲线的绝对定量 Case 1: The total number of target molecules is much smaller that the total number of droplets. All droplets have exactly 0 or 1 target molecules. # targets = # positive drops Case 2: The average number of copies per droplet is larger. Some droplets will