生物化学实验实验准备.doc

《生物化学实验》实验前准备：2005年5月 一、实验内容、试剂和器材（160人，80组） (一)实验一、淀粉的提取 实验二、总糖和还原糖的测定(定性) 试剂： (白色250ml)铜试剂（4000ml）：（A）26g 硫酸铜加水至于2000ml (B)48g酒石酸钾钠+80克无水碳酸钠+100克碳酸氢钠+72克草酸钾+3.2克碘酸钾 制备溶液B时，先用法700ml热水溶化前三种试剂，再加后两种至于2000ml，最后将（A）、（B）等量混合。 (不分装)0.005N硫代硫酸钠（20000ml）：24.8g硫代硫酸钠+2g碳酸钠+水配20000ml 0.005N溶液。 （白色滴瓶）1%淀粉（500ml）：5g可溶性淀粉溶于500ml饱和的NaCL溶液中煮沸。 （棕色60ml）2%碘化钾（2000ml）：40gKI+水至于2000ml。（定性） （强酸）（白色60ml）2N硫酸（1500ml）：166.6ml母液溶于水至1500ml。 （白色60ml）标准葡萄糖（1000ml 0.5mg/ml）：0.5g葡萄糖+水至1000ml。 地瓜或山芋 3Kg , 一组20克。 （白色60ml）待测还原糖：400ml稀释800ml。 器材：（1） 菜刀12支（2）菜板12块（3）捣碎机12台（4）恒温水浴锅12台（5）滴定管48支（6）子 铁架台+蝴蝶夹+铁圈48套。 （二）实验三、四、五、六淀粉酶性质的测定 试剂： （白色125ml）1%蔗糖（2500ml）：25g蔗糖+水至2500ml溶液。 (白色250ml)本尼迪克试剂（3000ml）：混合（A）、（B）。 （A）51.9g硫酸铜+水至450ml。 （B）519g柠檬酸钠+300g碳酸钠+水加热溶解至2550ml，冷却。 (白色250ml)0.5%淀粉（6000ml）：30g淀粉+水至6000ml, 煮沸。 (白色250ml)含0.3%NaCL的0.5%淀粉（4000ml）：20g淀粉+12g NaCL+水至4000ml，煮沸。 （白棕色60ml）1% NaCL (1000ml): 10g NaCL+水至1000ml溶液。 （白棕色60ml）0.1%CuSO4（1000ml）：15gCuSO4+H2O至1000ml溶液。 （手易着色）(棕色60ml)碘—碘化钾溶液（1000ml）： (棕色250ml)0.2M磷酸氢二钠（8000ml）：573.2g+水至 8000ml溶液。 （白色60ml）(白色125ml)0.1M柠檬酸（2000ml）：42.0g+水至2000ml溶液。 器材：（1） 恒温水浴锅12台（2） pH计4台 (3)电子天平均数（4）电磁炉。 （三）实验七 米氏常数和最大反应速度（碱性磷酸酶反应动力学测定）。 试剂： (60ml棕色)10mM PNPP（300ml）：1.113g+H2O至300ml溶液。 （白色60ml）20mM MgCL2（1000ml）：4.07g+水至1000ml溶液。 (白色250ml)0.1M 碳酸钠—碳酸氢钠 PH 10.1缓冲液（1500ml ,150人要3000ml）：0.1M碳酸钠 （ 21.2g碳酸钠+水至2000ml）； 0.1M碳酸氢钠（ 8.4gNaHCO3+H2O至1000ml溶液）。 1050ml Na2CO3+450ml NaHCO3至1500ml缓冲液。 （腐蚀性）(白色250ml)0.1M NaOH（3000ml）：50ml 6M NaOH+H2O至3000ml溶液。（150人要4000ml）。 (不分装)酶液(3mg碱性磷酸酶，旧的要12mg +水至500ml)。（缺货） 器材：（1）恒温水浴锅12台（2）722分光光度计25台 (四)实验十一、细胞色素C的制备试剂： 1．试剂： 猪心：26组×50g=1300g/班，两班共2600g。每次（7-8斤）5斤（星期二、五上午）。 （腐蚀性）(专用)10%NaOH（1000ml）：100gNaOH+H2O至1000ml溶液，分13瓶。 （腐蚀性）(白色125ml)20%TCA（500ml）：100g三氯醋酸+水至500ml溶液，分装6瓶。 （腐蚀性）（白色250ml）0.145mol/l TCA（3000ml）：71.1g+H2O至3000ml溶液。 硫酸铵：6瓶。 2．器材： （1）药匙48把（2）称量纸1袋（3）托盘天平12架（4）捣碎机12台。 （五）实验十二、凝胶层析法测定蛋白分子量 1．试剂： （1）(层析用)0.01mol/l Tris-HCl缓冲液，PH7.5，含0.2mol/l NaCl（10000ml）： 0.2mol/l Tris（1000ml），24.23g+H2O至1000ml溶液； 1N HCl（200ml），17.7ml浓HCl+H2O