小RNA的进展研究.pptVIP

一、有关的涉及内容 关于小RNA你知道有多少？ 非编码的小RNA在真核生物内大量存在，组成了十分复杂的调控网络。 目前非编码的小RNA研究已经成为生命科学研究的热门领域，并取得了一系列振奋人心的研究成果。 至今为止共发现了三类小RNA： 它们分别是：小干扰RNA（siRNA） 微小RNA（miRNA） 与piwi相互作用的 （piRNA） 有个问题： 基因选择性表达的机制有很多： 关于piRNA的产生 文献原文 （一）文献概述 首先，提出研究假设： 实验过程 实验过程 实验结论： Western Blot 蛋白质印迹 定义：一种分析和鉴定特定蛋白质的技术。即将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移至固相膜上，再用标记的抗体或二抗与之反应，以显示膜上特定的蛋白条带。 间接免疫荧光（indirect immunofluorescence ） 点突变(point mutation) 点突变 ： 指由单个碱基改变发生的突变。 　　 可以分为转换（transitions）和颠换（transversions）两类。 　　 转换：嘌呤和嘌呤之间的替换，或嘧啶和嘧啶之间的替换。 　　 颠换：嘌呤和嘧啶之间的替换。 WT：野生型 Miwi-/-：缺失型Miwi2DAH：突变型 （用苏木精和酸性伊红进行染色的3个月大的小苏的睾丸切片图） 从图中可以看出野生型和突变型的睾丸没有出现萎缩，但是缺失型出现了萎缩。 返回 （睾丸的IAP转座子被酶切的片段和用IAP的启动子作为探针进行甲基化敏感的Southern杂交图） WT：野生型 MiliDAH：突变型 箭头表示：此带没有被甲基化。 此图说明突变型的IAP启动子区没有被甲基化而野生型的启动子区被甲基化了。也就是说在野生型中IPA的转录表达被抑制了。 返回 （野生型和突变型中LINE1和IAP的表达水平图） WT：野生型 MiliDAH：突变型 从图中可以看出突变型中的LINE1和IAP表达水平明显都高于野生型 返回 WT：野生型 MiliDAH：突变型 （Western杂交显示图片） Orf1是LINE1蛋白的抗体。 图片中在突变型中出现了Orf1的两条带说明LINE蛋白被表达了。 野生型中没有说明野生型中没有表达。 返回 （用苏木精和酸性伊红进行染色的3个月大的小苏的睾丸切片图） 从图中可以看到： 野生型的睾丸没有出现萎缩现象。 突变型中70%的严重萎缩、30%的轻度萎缩。 返回 （免疫荧光法标记的目标蛋白和DNA） 绿色：LINE1和IAP抗体 蓝色：苯基吲哚标记的DNA WT：野生型 MiliDAH：突变型 可以看到 突变型有绿色荧光表示有LINE1和IAP的抗体，即有LINE1和IAP蛋白生成。 而野生型却没有。 返回 WT： 野生型 MiliDAH：Mili突变型 野生型和突变型的睾丸质量分析图 返回 Mili蛋白的抗体是Tub，Tub对跑完电泳的Mili蛋白进行染色。 WT和MiliDAH都有Tub就说明在WT和MiliDAH中都有Mili蛋白的表达。 Western杂交显示图片 返回 激光共聚焦显微镜观察到的间接免疫荧光图像 从图像中可以看到Tdrd9、Dcp1a、Miwi2等蛋白都能正常表达。 即点突变没有对它们的功能表达产生影响。 返回 返回 定义：直接免疫荧光技术的改进。待检细胞首先用未标记的抗体处理，使之与特异的抗原形成复合物，然后再用抗抗体的荧光标记抗体着色，即可检测出特异抗原在细胞中的存在部位，具有荧光增强效应。 返回 返回 * * 还记得这二位吧！ 2006 年度诺贝尔医学奖： Andrew Z. Fire 斯坦福医学院病理学和遗传学教授 Craig C. Mello 马萨诸塞州医学院分子医学教授 发现了RNA干扰现象 而今天我要讲的 就是关于piRNA的一篇进展研究的文献！ 为什么一个干细胞会分化成不同外观和功能的细胞？ 大多数人会说：是基因选择性表达的结果。 基因究竟是怎样选择性表达的，你们又知道吗？ 接着又有了一个问题： 如果不知道就接着往下听…… 其中的一种就是基因沉默： 让应该表达的基因表达，不该表达的基因沉默 而小RNA就能够导致一些特定基因的沉默。 比如说piRNA就能够导致一些转座子基因沉默 初级piRNA的产生方式： piRNA有两种产生方式 次级piRNA的产生方式： 以初piRNA为引导物进入乒乓循环模型不断产生次级的piRNA Mili Ag