[农学]生化工程-1-绪论.ppt

最常用的工业微生物 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 最常用的工业微生物 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 未培养微生物 定义：指迄今所采用的微生物纯培养分离及培养方法还未获得纯培养的微生物，其在自然环境微生物群落中占有非常高的比例，约为99％。 研究方法 模拟自然培养法: 原位培养、培养条件优化、 单细胞操作 宏基因组分析法 菌种的分离筛选 对菌种的要求： 低廉易得的培养基 快速的生长周期 易于控制 抗污染 适应性强 稳定不退化 非病原菌 菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 菌株的选择性分离 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 菌种分离的基本流程 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖后，在数量上占优势。（加入唯一营养源，施加选择压力等） 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 工业菌种的分离原则 1. 根据发酵条件来筛选适应菌种。 2. 菌的生长温度应尽量高。 3. 菌对环境和设备的适应性和稳定性。 4. 菌种的生产效率和毒性，副产物等。 菌种的筛选与分离 施加选择压力（1）控制培养基成分 （2）控制培养条件 （3）抑制不需要的菌类 利用菌种的生理活性特点 根据目的菌株及其产物特点分 ?? 选择性分离方法 随机分离方法 (定向筛选←选择压力) (用筛选方案- 检测系统进行间接分离） ?富集液体培养 固体培养基条件培养 (初筛) ? 菌种纯化 ? 复筛  菌种纯化 初步工艺条件摸索 再复筛 生产性能测试 较优菌株1-3株 保藏及进一步做生产试验 某些必要试验和 或作为育种的出发菌株 毒性试验等 菌种的纯种分离 （1）划线法：简单、快捷。 （2）稀释法：菌落单一均匀。 固体培养基划线法接种法 稀释涂抹接种法 生产性能的测定 一般采用两步法： 初筛：以量为主 复筛：以质为主 菌种选择的总趋势 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 菌种的选育 自然育种：利用菌种的自然突变而进行菌种筛选的过程叫自然育种。 自然选育的基础是菌种的高速传代繁殖和基因具有的变异性。 简单易行但效率很低，常用于菌种的纯化复壮。 诱变育种： 用各种物理、化学和生物的因素人工诱发基因突变。 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质。 诱变剂 物理：紫外线，快中子 化学：氮芥，亚硝基胍 { 诱变育种的一些问题 诱变手段的复合化与多样化 诱变强度的控制 正向突变与反向突变 变异菌株的筛选 抗噬菌体菌株的筛选 噬菌体对发酵工业的危害与抗噬菌体菌株的意义。 噬菌体的变异性。 杂交育种 指将两个基因型不同的菌株接合，使遗传物质重新组合，形成具有新的遗传性质的菌株，再从中筛选分离具有有利性状的新菌种。 原生质体融合 1.标记菌株的筛选 2.原生质体的制备 3.原生质体的融合与再生 聚乙二醇（PEG）－脱水剂 助融