疟原虫的制片技术教学教程幻灯片.pptx

疟原虫的制片技术.内 容（一）血片制作（二）染 色所需设备载玻片：清洁无油污，以免血膜受污染或脱落推 片：边缘光滑，用完后及时清洗，以免影响下次使用微量采血吸管：20ul，取血时可供参考胶 头：与微量采血吸管配套，注意不要吸进血液取血所用的设备：75%酒精棉球、一次性采血针、抗凝管等记号笔：写标签水、纸巾：用于清洗、拭干推片样本要求末梢全血：指尖、耳垂末梢全血，婴幼儿可取拇趾或足跟部全血。现场取血现场制片。静脉全血：采用抗凝管采血。最好取血后立即制片，如果血液放置时间过长会影响镜下形态。冷冻后的血液不能用于制片。骨 髓：临床上可用于确诊恶性疟感染，可查到恶性疟大滋养体和裂殖体。 注 意：（1）用抗疟药之前取血（用药后镜检结果往往是阴性）；（2）取血后应尽快制片（血细胞和疟原虫的形态保存完好）。血膜的种类要求：一张玻片上同时制作厚、薄两种血膜！！用于检查疟原虫的血膜用两种：一种是将血液涂成薄膜状，称为薄血膜；一种是将血液涂成圆盘状，称为厚血膜。血膜的位置薄血膜厚血膜标 签 6 5 4 3 2 1标准血片： 每张玻片涂厚、薄血膜各1个方 法： 将载玻片平均分为6等份：第1、2格用于贴标签；厚血膜涂在第3格中央；薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部外 观： 血片自左向右依次为薄-厚-标签厚血膜的制作方 法： 取洁净的载玻片1张，左手持载玻片平置，取约4～5ul血（相当于火柴头大小），右手持推片下端，使推片一角与血滴中心接触，由里向外一个方向旋转2～4圈，最后再回到中心，涂成直径0.8～1cm大小圆形厚血膜。位 置： 玻片中央偏右或6等份中的第3格中部。外 观： 圆形，厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。以1个油镜视野5-10个白细胞为宜。注 意： 厚血膜制作完成后一定要平放，倾斜会导致厚薄不均匀，容易脱落。薄血膜的制作方 法： 取约1～1.5ul的血（相当于1/4火柴头大小），使推片与平置的载玻片在血滴前方密切接触，并形成25°～35°夹角，后拉推片与血滴接触，待血液向两侧扩展约 2～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。位 置： 玻片左半部分或第4格前缘到第6格中部。外 观： 舌状，厚薄均匀，无划痕。在玻片上形成平铺的红细胞，红细胞之间互相接触而不相互重叠。注 意： 推制时速度要均匀。血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等会影响血膜的厚薄。正确的推片姿势标准的疟原虫血片染液的种类 目前临床上应用最广泛的是瑞氏染液和吉氏染液。我们推荐用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。染色前的处理 无论用吉氏染液还是瑞（吉）氏染液，染色前均需要对薄血膜进行固定，对厚血膜进行溶血处理。薄血膜固定：将血片薄血膜朝下，呈45°倾斜，用吸管吸取一定量的甲醇或无水乙醇进行固定。厚血膜溶血：将清水滴加于厚血膜上或将厚血膜向下插入水槽中，待厚血膜表面呈白色即可。 注 意：（1）固定薄血膜时甲醇一定不要碰到厚血膜；（2）厚血膜溶血后需要晾干再进行染色，否则厚血膜很容易脱落。 注 意：母液的稀释用水尽量选用pH为7.0-7.2的缓冲液。 原 因：当染液的pH值为7.0-7.2时染色效果较好，疟原虫的胞浆被染成蓝色，疟原虫的核被染成红色。 染液偏酸时，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而疟原虫的胞浆着色较差。 染液偏碱时，红细胞被染成紫蓝色，不易观察。吉氏染液的染色方法染色前的处理： 血膜干燥后,先用甲醇或无水乙醇固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的血片可省略这一步骤，因染液中含较高浓度的水，在染色过程中进行溶血），然后再进行染色。染液的配制： 每1ml缓冲液或蒸馏水，加吉氏母液2-3滴；或将母液和缓冲液按照1:9的比例混合。染色方法： 每张血片约需要染液2ml，将染液混合均匀，滴加于血膜上并覆盖整个血膜，染色15-20min。然后用清水轻轻将染液冲洗干净，晾干后镜检。瑞（吉）氏染液的染色方法染色前的处理： 血膜干燥后,先用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，待厚血膜晾干后，直接进行染色。（这种染色方法省略了固定薄血膜这一步骤，因染液中含较高浓度的甲醇，在染色过程中对薄血膜进行固定）。染液的配制和染色方法： 根据说明书操作。染色注意事项（1）滴加染液时吸管不要碰到血膜，否则容易出现划痕；（2）滴加染液时不要出现气泡，否则影响着色；（3）勿直接倾倒掉玻片上的染液，以防渣滓附着在玻片上冲不掉影响镜检；（4）冲洗染液的水流一定要轻缓，不要对着厚血膜冲，否则厚血膜直接被冲掉；如果用漂洗的方法，将血片倾斜着从水盆中取出。（5）一