微生物鉴鉴定系统-质谱法.ppt

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微生物鉴鉴定系统-质谱法

以前方法偏临床致病菌,环境很多不致病,开发少。传统方法很难鉴定环境菌。 * * 聚团泛菌;鲁氏不动杆菌;洋葱伯克霍尔德菌;解鸟氨酸拉乌尔菌;金黄色葡萄球菌;大肠埃希菌; * * * 铜绿假单胞菌(临床常见,好鉴定,绿色,有姜味,好鉴定);木糖氧化无色杆菌(临床不常见,不好鉴定,非发酵,无色)。二者耐药特点 * * Listeria monocytogenes在病原学上作为一种人畜共患和食源性疾病的致病菌已得到世界范围普遍的公认.由于其可导致人和动物患脑膜炎、败血症、流产等,病死率高达30%~70%,由单核细胞增生李斯特氏菌污染食品,引起食源性李斯特氏菌病(Foodborne Listeriosis)[1],在国内外已引起广泛的关注,并开展相应的研究。 欧米諸国ではready-to-eat食品(以下RTE食品)を原因とする食中毒が多発しています。このRTE食品とは消費者が購入後に加熱しない食品や調理済みの食品をさし、例としては食肉製品、チーズ等の乳製品、サラダ、スモークサーモンなどの燻製品などが挙げられます。 * 峰尖附近的菌株典型,山脚不太典型,但属于同一菌种。生化反应与典型的可能有些差别。 * * 中国疾病预防控制中心联合多家菌株保藏机构及软件设计公司开发的中文系统的微生物识别软件。MicroID系统数据库覆盖病原谱广,尤其包括大量中国地域特征的菌株信息,同国际同类软件相比明显提高了对病原的识别能力。 * 系统以分值和颜色来标记鉴定结果的可信度,默认为: 0-6分为不可信,显示为红色 6-8分为一般可信,显示为黄色 8-9分为可信,显示为绿色 9-9.999分为高度可信,显示为深绿色 可以根据需要选择单个或部分样本跟部分或全部微生物数据库进行对比并显示鉴定结果和对应谱图 * 系统目前包含三种报告格式:科研检测报告、应急检测报告和临床检测报告,科研和应急报告模板相同。 Research, emergency inspection report * * MALDI基质辅助激光解析附原理: Streptococcus pneumoniae: mass signals matching to ribosomal proteins (considering possible methionine cleavage and/or methylation) are marked in red ~50% of peaks unambiguously represent ribosomal proteins protein masses obtained from the Swiss-Prot/TrEMBL sequence database 微生物鉴定方法 感官 视觉, 嗅觉, 味觉 免疫 单或多克隆抗体 分子 PCR…… 生化 代谢能力和耐抗生素 耗时 气质法(GC-MS) 脂肪酸,小分子糖 MALDI-TOF MS * * 微生物鉴定新方法(MALDI TOF) 比现有方法鉴定更多生物多样性的病原体 分析时间仅1-2 minutes 现代微生物分类学:蛋白组学 & 基因组学 Protein Bacterial Cell DNA Genome Proteome DNA Fingerprint Mass Fingerprint Species Definition & Determination MALDI-TOF MS * * 不同细菌代表性指纹图谱不同 各菌种代表性峰型分布存在显著差异,有助于鉴定各个菌种! * * 肠杆菌 (Enterobacteriaceae)MS图谱示: 科, 属, 种特异性峰值 部分峰值是多数菌种共有的(如 m/z 4365: 核糖体蛋白 L36) 峰值有 科, 属, 种或 亚种-特异性 种间特异性代表峰值用来区分不同菌种 核糖体蛋白不受生长条件影响 Mass spectra of Proteus mirabilis DSM 4479 at different incubation times No major qualitative changes in peak patterns distinguishing family, genus and species Decrease of signal intensity over time Presence and absence of peaks Identification with >99% confidence 样品 SARAMIS 工作流程 转移细胞到MALDI 靶板 导入数据至SARAMIS LIMS 鉴定/ 比较分析 基质 微生物鉴定流程 生长在固体 培养基上的菌落 全细胞 MALDI-TOF谱图 数据库中参考谱图 输

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