[研究生入学考试]吉林大学生命科学学院生物化学5.ppt

3.9 氨基酸残基的测序 蛋白质测序有两种方法: 1. 通过氨基酸测序 2. 通过对应基因的DNA测序 通过氨基酸测序进行蛋白质测序的步骤 1. 确定多肽链数目; 2. 如果有多个肽链，分开; 3. 断开 (减少) 二硫键; 4. 确定每条链的氨基酸组成; 5. 通过Edman降解段蛋白水解酶和确定 N- 端和C-端残基; 6. 用特定的酶和化学手段将每个片段分为更小的片段; 7. 用 Edman 降解或质谱MS确定每个链的顺序; 8. 通过重叠的片段重建蛋白质的顺序; 确定二硫键的位置. §1. 确定 N- 端残基 1. FDNB二硝基氟苯： §2. 确定C- 段残基 1. 羧肽酶： (1)羧肽酶A 可以切碳端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸 (如果第二个氨基酸是Pro则无法使用); (2)羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg (如果第二个氨基酸是Pro则无法使用); (3)羧肽酶Y切所有的氨基酸; (4)羧肽酶C切所有的氨基酸; 2. 肼解： 3. 还原： 肽链-COOH + 硼氢化钠 肽链-CH2OH 水解 氨基酸 +氨基酸-CH2OH （1）酶切： 1．胰蛋白酶： 精氨酸, 赖氨酸的C端. 特异性高 2．糜蛋白酶： 苯丙氨酸, 色氨酸, 酪氨酸的C