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实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 一、实验目的 掌握动物组织中核酸提取与鉴定的基本原理及方法 通过实验掌握核酸的基本组成 熟悉移液枪、离心机、匀浆器的使用 二、实验原理 核酸（DNA、RNA）+ 蛋白质 → 核蛋白质 二、实验原理 1.核蛋白的提取： 二、实验原理 2 .从核蛋白中提取核酸 二、实验原理 2 .从核蛋白中提取核酸 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 三、实验操作 三、实验操作 三、实验操作 三、实验操作 三、实验操作 三、实验操作 三、实验操作 四、实验结果、现象 五、实验分析 特别说明： 处死小鼠、取肝方法 移液枪使用方法 离心机使用方法 匀浆器使用方法 修改：P.16“3”“核糖”；P.17“(3)”“核糖” *实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 * 肝组织匀浆 核蛋白沉淀 三氯醋酸 原因：三氯醋酸可沉淀蛋白质 核蛋白 核酸钠 + 蛋白质沉淀 10%NaCl 原因：10%的NaCl溶液中：核酸的溶解度高 蛋白质的溶解度低 核蛋白 核酸钠 + 蛋白质沉淀 10%NaCl 95%乙醇 核酸钠沉淀 核酸钠 碱基 + 戊糖 + 磷酸 硫酸 （嘌呤、嘧啶） （核糖、脱氧核糖） 磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 （1）磷酸的鉴定 （2）嘌呤碱的鉴定 嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） （3）核糖的鉴定 核糖 糠醛 绿色化合物 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 （4）脱氧核糖的鉴定 脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 浓酸 二苯铵 磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 核糖 糠醛 绿色化合物 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 浓酸 二苯铵 1.制备匀浆： 处死小鼠 取肝组织 生理盐水冲洗、吸干 匀浆管(小试管) 肝匀浆 三氯醋酸2ml 研磨 2.分离提取： 匀浆 短试管 静置3’ 3000转/分,3’ 生理盐水2ml 搅拌 弃上清 沉淀 10%NaCl 2ml 沸水浴3’ （搅拌） 3000转/分,3’ 冷却 上清倒入 小试管 逐滴加95% 冷酒精2ml 白色沉淀 ①静置5’ ②3000转/分,5’ 弃上清 核酸钠沉淀 3.核酸的水解： 上述核酸钠 5%H2SO43.5ml 搅拌 沸水浴加热10分钟 核酸钠 碱基 + 戊糖 + 磷酸 硫酸 4.RNA与DNA成分鉴定： （1）嘌呤碱的鉴定 ? 10d 2d 20d _ 对照管 ? 10d 2d _ 20d 测定管 颜色变化 5%AgNO3 浓氨水 5%H2SO4 水解液 管号 放入沸水浴4分钟，观察变化，静置15分钟，比较沉淀 （2）磷酸的鉴定 ? 20d 5d 10d _ 对照管 ? 20d 5d _ 10d 测定管 颜色变化 氨基萘酚磺酸 钼酸铵 5%H2SO4 水解液 管号 放置3分钟，沸水浴4分钟，观察表较颜色差别 （3）核糖的鉴定 ? 6d 4d _ 对照管 ? 6d _ 4d 测定管 颜色变化 3，5-二羟基甲苯 5%H2SO4 水解液 管号 沸水浴加热5~10分钟，观察比较颜色差别 （4）脱氧