微生物的实验室培养（用）参考.pptVIP

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算：（根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例） 物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 重量 2.称量 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？ 0.5g 1g 0.5g 2g 定溶至100mL 3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加少量水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，不断用玻璃棒搅拌，原因：防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。待琼脂完全熔化后，加蒸馏水至100mL。（注意：溶化后需先调节PH，再分装，然后灭菌) 4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，瓶口加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放到高压蒸汽灭菌锅内灭菌。将培养皿用几层报纸包紧，5-8套培养皿作一包，包好后放入干热灭菌箱内灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 在火焰旁 平板冷却凝固后，倒过来放置。 瓶口迅速通过火焰 倒入约10-20mL培养基 倒平板操作 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧瓶口灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 思考3 ①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热? ②加琼脂的目的是什么? 可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能 溶于水中,减少误差 作为凝固剂 思考4 ①在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？ ②培养皿能否用高压蒸汽灭菌？ 在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞； 在取出培养基锥形瓶时也能起到隔绝空气中杂菌污染的作用 不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② （NH4）2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 4、右表是某微生物培养基成分，请据此回答： （1）右表培养基可培养的微生物类型 是 。 （2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基，可再加入 ，用于培养金黄色葡萄球菌。 自养型微生物 含碳有机物 （3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养 。 （4）表中营养成分共有 类。 （5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是 。 （6）右表中各成分重量确定的原则是 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是 。 自生固氮微生物 3 调整pH 依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂） 倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此不要继续用这个平板培养微生物。 （二）纯化大肠杆菌 微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。 1.平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。 由一个或几个连在一起的同种细胞在固体培养基上大量繁殖形成肉眼可见的子细胞群体称为菌落。 2.特征： 不同菌种所形成菌落的大小、形状、颜色等不同。 3.功能： 1.定义： 补充知识点：菌落 菌落是鉴定菌种的重要依据 1.平板划线操作： 菌液 划3个平板 1个不划线 接种环 防止划破培养基 （空白对照） 瓶口通过火焰 瓶口通过火焰 灼烧 冷却 沾取菌液 从上一次划线末端开始划线 平板划线接种 灼烧接种环 冷却 划线 （第一区域） 蘸取菌液 灼烧接种环 冷