CN107475384-CN201710717164-一种锰镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107475384 A (43)申请公布日 2017.12.15 (21)申请号 201710717164.X (22)申请日 2017.08.21 (71)申请人 南京农业大学 地址 210000 江苏省南京市玄武区卫岗1号 (72)发明人 陈晨　夏妍　沈振国　陈亚华　 陆敏　 (74)专利代理机构 南京纵横知识产权代理有限 公司 32224 代理人 董建林　薛海霞 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) G06F 19/12(2011.01) 权利要求书2页 说明书15页 序列表3页 附图3页 (54)发明名称 一种锰/镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选 方法 (57)摘要 本发明涉及植物修复技术，具体为一种锰/ 镉吸收高效分子生态型美洲商陆的筛选方法，包 括如下步骤：野外采集我国多个污染地区和非污 染地区美洲商陆种群的叶片、种子和附近的土 壤；检测多个地区美洲商陆种群附近土壤的锰/ 镉含量，分别选取高锰污染、高镉污染、非污染地 区的美洲商陆种群；对选取的美洲商陆种群叶片 进行AFLP分子标记检测，分析其遗传结构；选取 发生不同遗传分化的美洲商陆种群室内繁殖幼 苗，将幼苗进行锰、镉和正常Hoagland溶液培养 50天，以美洲商陆株高、鲜重及叶片锰/镉含量为 A 指标筛选出锰/镉吸收高效生态型美洲商陆。本 4 发明将锰/镉吸收高效生态型超积累植物用于治 8 3 5 理锰/镉污染土壤，提高植物对重金属的积累量 7 4 7 和修复效率。 0 1 N C CN 107475384 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种锰/镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选方法，包括如下步骤： 1)野外采集我国多个污染地区和非污染地区美洲商陆种群的叶片、种子和附近的土 壤； 2)检测多个地区美洲商陆种群附近土壤的锰/镉含量，分别选取高锰污染、高镉污染、 非污染地区的美洲商陆种群； 3)对选取的美洲商陆种群叶片进行AFLP分子标记检测，分析其遗传结构； 4)根据AFLP遗传分析的结果，选取发生不同遗传分化的美洲商陆种群室内繁殖幼苗， 将幼苗进行锰、镉和正常Hoagland溶液培养50天，以美洲商陆株高、鲜重及叶片锰/镉含量 为指标择优筛选出锰/镉吸收高效生态型美洲商陆。 2.根据权利要求1所述的一种锰/镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选方法，其特征在 于： 在步骤2)中，土壤锰和镉的测定采用浓酸湿法消煮的方法，使用优级纯的硝酸和高氯 酸按照体积4:1配成混酸，常温下冷消煮10h，然后用电热消煮炉逐步升温至160-180℃蒸 干。 3.根据权利要求1所述的一种锰/镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选方法，其特征在 于： 在步骤2)和步骤3)之间，还有如下步骤：对选取的高锰污染、高镉污染、非污染地区的 美洲商陆种群，采用内梅罗污染指数进行污染评价。 4.根据权利要求1所述的一种锰/镉吸收高效生态型美洲商陆的筛选方法，其特征在 于： 在步骤3)中，AFLP分子标记检测具体过程为：使用EcoRI+MseI 2个限制性核酸内切酶 对基因组DNA酶切、接头连接、预扩增、选择性扩增、毛细光荧光电泳；筛选出的适用于美洲 商陆选择性扩增的8对引物为E14×M13、E14×M42、E21×M14、E21×M21