黄龙病的热处理试验.DOC

热水处理对柠檬接穗中黄龙病菌脱除效果研究 郭俊，赖新朴，李进学，段惠芬，王自然，毛加梅，赵俊，潘黎，高俊燕* （云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所，云南 保山 678000） 摘要：采集感染黄龙病的尤力克柠檬接穗，分别用不同温度和不同时间长度的热水处理，结果显示预先用45℃温水预处理30min，然后用47℃温水处理20min，嫁接前接穗无褐化，且发芽率在96.67%以上。该方法处理后的接穗嫁接160天后，PCR检测为阴性，网室种植3年后也没有植株表现黄龙病症状。说明该处理可以有效消除柠檬接穗上的黄龙病菌。 关键词：柑橘黄龙病；黄龙病菌；热处理；柠檬；接穗； 热处理是利用热蒸汽，热水和干热等方式对指植物的组织或器官等进行处理，是根据病毒和宿主细胞对高温忍耐程度有差异，采用适当的温度及时间处理，消除或钝化寄主所带细菌、真菌及病毒，从而达到脱毒目的[1]。该技术已运用于柑橘[2]、沙梨[3]、油桃[4]、苹果[5]、花卉[6]、草莓[7]，马铃薯[8]等植物的脱毒处理。 柑橘黄龙病（Huanglongbing，HLB）是一种导致柑橘减产和毁灭的细菌性病害[9]。利用抗肽类物质或抗生素注干、喷施及灌根等处理，效果不理想[10-13]。上世纪50年代我国学者把热处理运用于防治柑橘黄龙病，并且起得了明显的成效[14-21]。然而对于柠檬接穗热处理鲜见报道，本试验通过对感染黄龙病的接穗进行热处理，探寻处理檬接穗的最佳温度和时间，旨在为柠檬种苗繁育过程中，为快速脱出柑橘黄龙病菌提供技术支持。 1 材料与方法 1.1供试样品 从云南省瑞丽市勐秀乡勐典村云南省农科院热经所瑞丽站柠檬基地内感染黄龙病的6年生枳壳砧云柠1号尤力克上采集老熟枝条。 1.2处理方案 10个枝条为一捆，3捆为一处理。在45℃热水中预处理5min后，快速冷却，然后按如下方案进行处理（表1）。处理完毕后枝条于室温保湿12h后,挑选无褐化芽眼饱满的枝条嫁接于网室内。共25个处理，每处理设3次重复，每重复设20株。 表1 不同处理的温度和时间 编号 处理 编号 处理 R01（阳CK1） 带病枝条不做任何处理 R14 50℃处理10min； R02（阳CK2） 带病枝条不做任何处理; R15 50℃处理15min； R03（阴CK3） 采集完全健康枝条，不做任何处理。 R16 50℃热水处理6min后，，反复3次，中间冷水冲淋降温； R04 45℃处理15min； R17 50℃热水处理12min，反复3次，中间冷水冲淋降温； R05 45℃连续处理30min； R18 52℃处理5min； R06 45℃连续处理60min； R19 52℃处理8min； R07 47℃热水处理6min，反复3次，中间冷水冲淋降温； R20 52℃处理10min； R08 45℃处理30min后， 47℃热水处理20min ； R21 52℃处理15min； R09 47℃热水处理12min，反复3次，中间冷水冲淋降温； R22 55℃处理5min； R10 45℃处理30min后， 47℃热水处理30min ； R23 55℃处理8min； R11 49℃处理15min； R24 55℃处理10min； R12 50℃处理5min； R25 55℃处理15min； R13 50℃处理8min； 1.3 试验数据调查 分别于嫁接前，嫁接后15d，30d，35d，60d，75d，160d开展调查，统计嫁接前，嫁接后160天的发芽率、发病率及株高。 1.4 PCR检测 核酸提取技术及检测方法参见董鹏等[22]，所使用引物0I1／OI2c，由上海生工生物工程公司合成。 2 结果与分析 2.1热处理对接穗及其嫁接苗的影响 表2热处理对接穗及其嫁接苗的影响 处理 褐化率（%） 嫁接前 发芽率（%） 嫁接后160d 发病率（%） 嫁接后160d 株高(cm) 嫁接后160d R01（阳CK1） 0.00 86.67 100 73.40 R02（阳CK2） 0.00 90.00 100 86.33 R03（阴CK3） 0.00 94.67 0.00 129.04 R04 0.00 65.00 20.00 117.47 R05 0.00 91.67 11.00 131.16 R06 40.00 86.67 0.00 120.96 R07 0.00 96.67 12.00 114.28 R08 0.00 96.67 0.00 128.88 R09 0.00 81.67 0.00 121.84 R10 0.00 85.00 0.00 125.72 R11 0.00 90.00 0.00 115.93