苦参碱脂质体的制备精选.docVIP

苦参碱脂质体的制备方法 【摘要】探讨制备苦参碱脂质体的不同工艺。主要介绍主动载药与被动载药这两大类制备方法，根据其不同的优缺点进行比较。 【关键词】 苦参碱脂质体 主动载药 被动载药 前言 苦参碱脂质体（liposome）是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，苦参碱脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形苦参碱脂质体，直25~1000nm不等。苦参碱脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用苦参碱脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部例如，氟尿嘧啶苦参碱脂质体，就是用磷脂(卵磷脂或脑磷脂)和胆固醇与磷酸二鲸蜡脂，按摩尔比7：2：1或4．8：2．8：1配成氯仿溶液，真空蒸发除去氯仿，使在器壁上形成的薄膜加入等渗的缓冲液(pH为6．0，0．01mol／L磷酸盐)，其中含氟尿嘧啶77 mmol／L，类脂质在缓冲液中的浓度为50～70mmol／L，加玻璃珠数枚，搅拌2min，在25℃放置2h，使薄膜吸胀；再在25℃搅拌2h，得到苦参碱脂质体，粒径为0．5～5μm。 将磷脂经超声处理，然后高度分散于缓冲盐溶液中，并加入冻结保护剂(如甘露醇、葡萄糖、海藻酸等)，冷冻干燥后，将干燥物分散到含药物的缓冲盐溶液或其他水性介质中，即可形成苦参碱脂质体。目前，该法已成为较有前途的改善苦参碱脂质体制剂长期稳定性的方法之一。例如，维生素B。苦参碱脂质体的制备，取卵磷脂2．89分散于100mmol／L磷酸盐缓冲液(pH为7)与0．9％氯化钠溶液(1：1)的混合液中，超声处理后与甘露醇混合，于真空下冷冻干燥，随即用含l2．5mg维生素Bt。的上述缓冲盐溶液进行分散，进一步超声处理，即可得到均匀苦参碱脂质体混悬液。 例如，氨基酸苦参碱脂质体的制备，取氨基酸50mg溶于pH为7．1的磷酸盐缓冲液中，加入到由磷脂25mg、胆固醇4．2mg、磷酸二鲸蜡脂2．8mg，溶于5．5ml氯仿环己烷制成的溶液中，蒸发除去环己烷，残液经超声分散，分离出苦参碱脂质体，重新混悬于磷酸盐缓冲液中。该苦参碱脂质体在4℃能贮存一个月，可供口服或注射给药，具缓释作用。 此法首先制备包封有药物的苦参碱脂质体，然后冷冻。在快速冷冻过程中，由于冰晶的形成，使形成的苦参碱脂质体膜破裂，冰晶的片层与破碎的膜同时存在，此状态不稳定，在缓慢融化过程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成苦参碱脂质体。此法第1步将磷脂溶于有机溶剂，加入待包封药物的溶液，乳化得到W/O 初乳，第2步将初乳加入到10倍体积的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，然后在一定温度下去除有机溶剂即可得到苦参碱脂质体。用乳化法制得苦参碱脂质体的包封率比较高，但是粒径较大。50℃（并用磁力搅拌）的磷酸盐缓冲液（或含有水溶性药物）中，加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止，即制得大多孔苦参碱脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。再将苦参碱脂质体混悬液通过高压乳匀二次，则所得的成品。 例如亚油酸苦参碱脂质体，取磷酸盐缓冲液100ml，在磁力搅拌器上搅拌加热至约60℃；再称取1g精制大豆磷脂、1g胆固醇、1g亚油酸及2g油酸山梨坦溶于30ml乙醚中，然后滴注于上述60℃缓冲盐溶液中，继续搅拌，加适量缓冲盐溶液至100ml即得。 W/O乳剂减压蒸发除去有机溶剂达到胶态后，加入磷酸盐缓冲液，旋转使器壁上凝胶脱落，继续减压蒸发除去有机溶剂，得到苦参碱脂质体水性混悬液。本法特点是包封的药物量大，体积包封率可大于超声波分散法30倍，适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质。如各种抗生素、胰岛素、免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等。 例如超氧化物歧化酶(SOD)苦参碱脂质体的制备，将卵磷脂lOOmg和胆固醇50mg溶于乙醚中，加入用4mmol／L磷酸盐缓冲溶液(PBS)配成的SOD溶液，超声处理2min(每处理0．5min，间歇0．5min)，立即在水浴中减压旋转蒸发至呈现凝胶状，旋涡振荡使凝胶转相，再继续蒸发除尽乙醚，超速离心(35000r／min，30min)分离除去未包人的SOD，沉淀用水洗2次，离心，得沉淀，，用10mmol／L PBS稀释即得。 传统的苦参碱脂质体制备方法，必须要使用氯仿，乙醚、甲醇等有机溶剂，这对环境和人体都是有害的。超临界二氧化碳是一种无毒、惰性且对环境无害的反应介质。用超临界法制备了头孢唑林钠苦参碱脂质体，将一定量的卵磷脂溶解于乙醇中配得卵磷酯乙醇溶液，与头孢唑啉钠溶液一起放入加入高压釜中，将高压釜放入恒温水浴中，通入CO2。在其超临界态下孵化30min，制备苦参碱脂质体。采用超临界CO2法制备的包封率高、粒径小，稳定性增强。 对于两亲性药物，如某些弱酸弱碱，其油水分配系数介质pH和离子强度的影响较大，用被动载药法制得的苦参碱脂质体包封率低。主动载药是利用两亲性的药物，能以电中性的形式跨越脂质双层