微生物鉴定技术在药品检验及监管中的应用（简版）-徐 伟 东.ppt

在上海市食品药品监督管理局的统一规划下，制定企业生产环境微生物科学采集方法，建立以企业定期自行微生物检查为主，政府监管部门外部督查为辅，在药品检验所的技术支撑下，敦促制药企业收集环境微生物信息，建立企业菌种信息库和污染源分布信息图，最终，健全上海制药企业的环境监控体系及污染溯源能力，为药品微生物风险评估和政府监管建立一种新的模式 上海市微生物污染的监管模式 xuwd888@ 021 同一株菌反复污染洁净环境要引起检验人员高度重视 仅靠洁净室内部消毒措施很可能起不到排除污染的作用 要对洁净室送风系统和检验人员携带污染进行全面调查 建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。将污染信息并与历史污染物比对，回顾调查，帮助质量体系的改进。 微生物进行鉴定菌株来源 共241株 四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用 增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据 政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力 与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系 应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用 4.1 4.2 4.3 4.4 在药品微生物检验中的应用 在严格依据法定方法进行检验的同时，结合微生物鉴定技术平台，对检验过程和检验结果进行双重复合和监控。通过对比环境监测的微生物种群类别和样品微生物种群情况，客观准确的评价检验质量，增菌检验报告的含金量。 在细菌污染检查中的应用 分离纯化得到单菌落 菌落形态检验 DNA提取 构建系统发育树 分子生物学鉴定 通用引物扩增细菌16S rDNA 序列 16S rDNA序列分析 鉴定结论 样品接收 革兰氏染色 API鉴定 形态鉴定 生化鉴定 VITEK鉴定 细菌的鉴定流程图 在真菌污染检查中的应用 在真菌污染检查中的应用 现行国标仅能够对曲霉属，青霉属，镰刀菌属等少数几个种属的霉菌进行鉴定。 我国的食品卫生微生物学检验国家标准中，对于青霉菌的鉴定需要在分离纯化后培养12-14天，再对其孢子及菌丝进行形态学观察。 真菌孢子易于在空气中飘散，难以杀灭，对实验室环境和检验人员安全具有潜在污染风险。 分子生物学鉴定技术有效的解决了区分污染来源的问题。该方法不需要使用选择性培养基，纯化后即可进行菌种鉴定。对真菌的菌丝体和孢子均能够进行DNA的提取，避免霉菌产生的大量孢子对实验室工作环境带来的潜在污染危害 真菌的鉴定流程图 分离纯化得到真菌样品的单菌落 真菌菌落形态观察 真菌DNA的提取 构建系统发育树 分子生物学评价 通用引物扩增真菌ITS 序列 ITS序列在GenBank中进行Blast分析 鉴定结论 四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用 增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据 政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力 与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系 应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用 4.1 4.2 4.3 4.4 美国FDA在要求药厂将微生物鉴定到“种”一级，并建议在微生物形态和生化反应鉴定之外采用基因分型技术进行分析，以便对生产环境的微生物污染进行监控 对药厂生产环境监管和风险评估上应用 上海某药业产品受微生物潜在污染风险 上海某药业有限公司无菌产品微生物污染溯源 某医疗器材有限公司灭菌方法研究 对药厂生产环境监管和风险评估上应用 某制药厂沉降菌同源性分析 检测实验室 微生物信息库 制药企业 微生物信息库 同 源 性 分 析 比 对 污染源 是 否 微生物鉴定技术平台建设的意义及运用 鉴 定 四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用 增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据 政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力 与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系 应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用 4.1 4.2 4.3 4.4 4.4 应用范围广，扩展能力强，可进行产品真伪鉴别和致敏原检测 国际上普遍加强了有关食品标签的法律法规，对相关标准不断细化。越来越多国家和地区开始全面实施对食品致敏原成分加以标识的规定 酶联免疫技术 PCR技术等 动植物产品的真伪鉴定 追踪产品产地 鉴别产品主要组成成分 微生物鉴定技术平台的建设 二 样品微