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自动生化分析仪基本参数及应用 试剂研发部 张莉 2007年7月 了解生化分析仪基本参数的原理 为正确使用仪器、试剂提供指导 有助于正确分析和处理测定数据 主要内容 分析方法简介 分析参数设置 分析方法简介 终点法（平衡法）：TP、Glu等 动力学法（连续监测法）：ALT、CK等 固定时间法（两点速率法）：CREA(苦味酸法)、UREA 免疫透射比浊法：IgA、CRP等 胶乳增强免疫比浊法：HS-CRP 必选分析参数 项目名称 方法类型 波长（主/次） 样本量 备选分析参数 样本预稀释 样本空白 参考值范围 可报告范围等 某些重要的分析参数介绍及设置 波长 试剂空白 底物耗尽限 延迟时间 反应时间 抗原过剩限 波长的选择 单波长 当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用单波长。如果一个物质有几个吸收峰，可选用吸光度最大的一个波长，或者选择在吸收峰处吸光度随波长变化较少的某个波长。 双波长 当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。 消除噪音干扰 减少杂散光影响 减少样品本身光吸收的干扰 波长的选择 单波长测定易受样品溶血、黄疸、脂浊等因素干扰。双波长测定可以通过副波长加以修正，减少甚至消除干扰因素，提高测定准确性。 溶血、脂血、黄疸等的光谱吸收特性 波长的选择 测定波长选择有三个主要条件： 待测物质在该波长下的光吸收最大。 其吸收峰宜较宽而钝，而不是处于尖峰或陡肩，一般不选光谱中的末端吸收峰，换句话说，该吸收峰处的吸光度随波长变化较小。 常见干扰物在该波长下的光吸收最小。试剂盒说明一般已提供波长参数。实际波长选择需要了解待测物质和干扰组分对不同波长单色光的吸收程度，即以波长为横坐标、吸光度为纵坐标作吸收光谱曲线(光吸收曲线)。 波长的选择 先主后次。 被测物：主次差异大。 干扰物：主次差异小。 双波长选择常见：血红蛋白340nm和380nm波长吸光度相同，以NADH作为测定底物或产物的试验常采用340／380nm；有的也采用340／405nm。ALP和GGT常使用405/476nm，Trinder反应多选取520／600nm或550/660nm．免疫比浊常选用340／700nm等。 试剂空白 试剂空白参数 试剂空白吸光度范围 试剂空白速率 用于监测试剂质量及仪器稳定性，利用试剂空白对试剂本身或反应漂移引起的误差进行补偿，用以校正△A或△A/min。 试剂空白吸光度 Trinder反应： ≤0.1-0.4 反应吸光度向上的取上限值： 以结合型硝基苯衍生物为底物：≤0.6~0.8 反应吸光度向下的取下限值：≥1.0 每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质。但试剂吸光度上限和下限不是试剂质量的唯一指针。一定的校准频率和室内质控是质量保证的必需手段。 迈瑞部分生化试剂的空白吸光度要求 试剂空白监测参数 试剂空白速率 顾名思义就是在反应过程中对试剂空白的变化速率作连续监测（以水为样本），其数值在样品测定结果中自动扣除。此参数主要用于连续监测法。 还原型辅酶，本身不稳定而分解，多呈下降趋势 底物自发降解 硝基苯衍生物，在碱性条件下自发水解，多呈上升趋势 杂酶或干扰物的影响：胆红素对苦味酸法测肌酐的影响 一般认为酶活性测定的试剂空白速率(△A/min)应≤0. 001~0.003 底物耗尽限 仅对动力学法有效，对于采用负反应分析酶活性的方法甚为重要。 一些高浓度（活性）样本使底物耗尽，使反应不再为0级或1级反应，为能正确反映测定结果，需设置底物耗尽限（某一特定吸光度），该吸光度应正好是反应曲线中线性区与非线性区或1级反应区与多级反应区的临界点。 在连续监测法测定酶活性时，如果在监测期内吸光度上升或下降超过其底物耗尽限，则说明该样品酶活性非常高，底物将被耗尽，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠。此时不打印结果或打印结果同时也打印出底物耗尽提示，该样品应