红葱黄酮红葱甲素提取与测定.docVIP

黄酮提取方法： 1材料与方法 1.1材料①红葱。②试剂：95%乙醇；甲醇CP；三氯化铝CP；盐酸CP；氨水CP；正丁醇CP；冰乙酸CP；乙醇乙酯CP；芦丁对照品（中国生物制品检定所）。③仪器设备：紫外线分光光度计；DZF-150小型真空恒温干燥箱；离心机；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。 1.2 方法 1.2.1 工艺流程洋葱中总黄酮提取工艺流程。 新鲜红葱-----去皮------清洗-----加水打浆------浸提-----四层纱布过滤-----真空抽虑-----黄酮提取物-------孔吸附树脂吸附------解析-----旋转蒸发----冷冻干燥---总黄酮。 1.2.2 操作步骤 新鲜葱，切碎，烘干，取50 g，置于大的烧杯中，加蒸馏水煮沸3 h。冷却后进行粗滤，对滤渣用上述方法进行再浸取2次，将3次滤液合并，滤液用高速离心机分离 15 min，1 500 r/min。并进行加热浓缩（加热温度在85℃左右）。浓缩冷却后加入等体积95%乙醇，放入冰箱内2 h。用高速离心机进行分离15 min，1 500 r/min。过滤得滤液滤渣，弃去滤渣。对滤液进行蒸发浓缩（加热温度在85℃左右）。待乙醇蒸发完后，将浓液置于真空干燥箱中干燥成疏松固体，粉碎得终产物。 1.3 总黄酮的含量测定 1.3.1 标准曲线的制备 1.3.1.1芦丁对照品溶液的制备精密称取120干燥恒重的芦丁标准品mg，加80%乙醇置水浴加热溶解冷却定容至25mL容量瓶中即为0.4mg/mL的芦丁对照品溶液摇匀备用.3.1.2最大吸收波长的选择精密吸取0.4mg的芦丁对照品溶液lmL置于25mL的容量瓶中加5%亚硝酸钠.75mL，放置6min后加10%硝酸铝0.75mL放置6min再加4%的氢氧化钠10mL加蒸馏水至刻度摇匀放置15min以空白试剂作对照进行全波长扫描确定最大吸收波长 1.3.1.3芦丁标准工作曲线的绘制精密吸取标准品溶液0.00.5，1.0，1.5，2.0，3.0mL，分别置于25mL容量瓶中加5%亚硝酸钠0.75mL放置6min后加10%硝酸铝0.75mL放置6min再加4%的氢氧化钠mL，加水至刻度摇匀放置5min。以第一管为空白在最大吸收波长处测定吸光度值以吸光度值为横坐标芦丁对照品溶液浓度为纵坐标绘制标准曲线 1.3.2 提取物含量的测定精密称定提取物1.5g，置索氏提取器中，加95%乙醇回流至无色（6～8 h），将提取液置于烧杯中，沸水浴加热浓缩至干，再用热水洗涤3次，将洗液移至分液漏斗中，并加无水正丁醇液萃取3~5次，10 m/次。合并萃取液于烧杯中，沸水浴蒸干，再加95%乙醇使其溶解，并移于50 ml容量瓶中，再加95%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10 ml于50 ml容量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀，按标准曲线的制备操作测定吸光度。 1.3.3 ①紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。②浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。③三氯化铝反应：取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。 ④乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。⑤盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓的盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。 材料与试剂 新鲜红葱(60℃以下烘干3～5h，粉碎，粒度≤1mm) 红葱甲素标准品 ；甲醇；四氯化碳；氯仿；石油醚；3，5-二硝基苯；甲酸；氢氧化钾；所用试剂都为分析纯。 柱层析硅胶 (100~200目)、(200~300目)薄层层析硅胶板GF254( 20×20cm)。 Kedde’s 试剂的配制： A：1%3 ，5 - 二硝基苯甲酸的甲醇溶液 B：10% 氢氧化钾甲醇溶液 按A:B ＝3:1 现用现配，喷雾使用。 仪器： 三用紫外分析仪，HP1100 高效液相色谱仪。 2 试验方法 2.1 甲素高含量粗提物的制备方法 2.1.1 浸提溶剂的选择 取15g 加入圆底烧瓶中，分别用溶剂 (50% 甲醇、70% 甲醇、甲醇、95% 乙醇、水)浸泡回流提取 (60ml × 3，5h)，过滤，合并滤液，浓缩得到醇浸膏，加入等量的水，混合成悬浮液，再用氯仿30m×3 萃取，合并氯仿液，用无水硫酸钠干燥后浓缩，得氯仿浸膏A1~A5。氯仿浸膏直接用甲醇∶水＝80∶20的混合溶剂定容至10m，用高效液相色谱分析含量。 2.1.2 萃取溶剂的选择 取600g 加