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DNA dNTP ATP dNTP dNTP ——双脱氧测序 双脱氧测序：dNTP和ddNTP的混合物 引物 引物 10 – 35 bp 通用引物 ITS, trnL-F, matK 物种特异引物 SSR引物 引物 几个有用的数据库 NCBI: National Centre of Biotechnology Information EMBL: European Molecular Biology Laboratory DDBJ: DNA Data Bank of Japan Taq聚合酶 Taq聚合酶 来源：水生栖热菌（Thermus aquaticus） 特点： 　酶活性 70℃, 60bp/second 　热稳定性 95℃, 40min, 50%活性 　外切酶活性 5’ 3’核酸外切酶活性 　作用环境　偏碱性　Tris-HCl Q：PCR过程中如何保证PCR产 物的忠实性？ Mg2+ 　Taq聚合酶是Mg2+依赖性的 　 Mg2+浓度能改变酶的催化活性和产物 浓度过高，非特异性扩增 浓度过低，聚合酶活力显著下降 Taq聚合酶与 Mg2+存在固定的配比关系？ 热变性 引物退火 引物退火 退火温度 温度越高，结合特异性增加，效率降低 温度越低，结合特异性降低，效率增加 　 温度梯度 　 Touchdown 链延伸 链延伸 P