第1章.2基因工程的基本操作程序(831KB).pptVIP

1.2 基因工程的基本操作程序 点此播放教学视频 基因的结构 RNA聚合酶结合位点 编码区 原核细胞基因结构 真核细胞基因结构 终止子 非编码区 外显子 内含子 非编码区 非编码区 编码区 非编码区 启动子 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 基因表达载体构建 导入受体细胞 目的基因检测与鉴定 第一步 第二步 第三步 第四步 点此播放教学视频 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的基因 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 请阅读P9第一和二两段 点此播放教学视频 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。. 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） （一）.从基因文库中获取 点此播放教学视频 如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因的表达产物蛋白质等特性 点此播放教学视频 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③前提条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________. ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即___（n为扩增循 环的次数） 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n (二)利用PCR技术扩增目的基因 缓冲溶液 点此播放教学视频 ⑤过程： a、DNA变性（90℃-95℃）： 双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、 退火（55℃-65℃）：引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物处延伸，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 PCR扩增仪 点此播放教学视频 DNA合成仪 蛋白质的氨基酸顺序 mRAN 核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 推测 推测 合成 当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法通过DNA合成仪直接合成目的基因。 （三）人工合成 点此播放教学视频 二、基因表达载体的构建(核心） 用限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子，即基因表达载体。 点此播放教学视频 质粒 切取目的基因 限制酶 DNA连接酶 重组DNA 二、基因表达载体的构建(核心） 点此播放教学视频 基因表达载体的构建的目的 组成： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 目的基因 启动子 终止子 标记基因 点此播放教学视频 (三)将目的基因导入受体细胞 转化 — 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 点此播放教学视频 将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 点此播放教学视频 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 早期胚胎培养 新性状动物 点此播放教学视频 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）原核生物特点：繁殖快、单细胞、