毕赤酵母发酵复习课程.pptVIP

题目 Regulation of alcohol oxidase 1 (AOX1) promoter and peroxisom biogenesis in different fermentation processes in Pichia pastoris;1背景介绍 2实验材料和方法 3实验结果 4结论与分析; 1.2过氧物酶体(Peroxisome)：遍布于真核生物的细胞器中, 用来去除有害物质. 它们用外表的单层膜与细胞的原生质分隔开来, 膜上有功能重要的膜蛋白, 用以向细胞器中输入蛋白质和促进细胞分裂. 与溶酶体不同的是, 过氧物酶体不是由分泌通路产生, 而是通过先涨大后分裂的自我复制过程产生, 当然也有证据显示新的过氧物酶体可以直接产生. 过氧物酶体是由比利时细胞学家德迪夫(Christian de Duve)在1965年发现的. ; 1. 3GFP-SKL（过氧化物酶体定位蛋白）,该载体含有融合了过氧化物酶体定位信号1(PTS1)的绿色荧光蛋白报告分子GFP-SKL编码基因 成功地用于描述不同 时间进程的AOX1启动子和过氧物酶体生物合成因素的特征;二：实验材料和方法;;2.5抗体效价的测定 ;2.6:细胞裂解 ;3实验结果与讨论; 3.2:YGLY29325的三种不同的补料分批发酵条件的取样数据(a) 甲醇限制 (ML); (b) 葡萄糖培养8h甲醇培养(20 h) (SML); (c) 氧气限制并额外增加1%甲醇（OL）DO (%) ：黑色直线，甘油或葡萄糖：蓝色,甲醇:红色。细胞湿重：黑色三角; 3.3毕赤酵母AOX1启动子（YGLY29325）根据三种不同的补料分批条件规制 - 甲醇 - 限制（ML），切换与葡萄糖和甲醇（SML）和氧气限制（OL）补料分批条件。 （a） GFP荧光表达图像（b）不同诱导时间的荧光蛋白相对密度。对于ML和OL，时间表示分批阶段（T1），甘油补料分批阶段诱导前（T2）和诱导期（T3，10±2小时; T4中，36±2小时; T5，62±2小时; T6，84±2小时）。对与SML条件下，细胞生长是在T2，T4和T6 葡萄糖阶段，诱导是在T3和T5甲醇阶段; 3.4：ML，OL，及（b）SML - 过氧化物酶体的生物合成三种不同的培养条件下比较。 SML：切换葡萄糖和甲醇进料。在过氧化物酶体中使用GFP-SKL（YGLY31884）进行定量测定。数据点表示在两个独立的运行平均值。星号（*）表示甲醇阶段; 3.5三种不同的工艺条件下（YGLY29325）发酵特性 - ML，OL和SML。 （一）细胞的密度分布（gWCW/ L）; （二）细胞列解指数（毫克 DNA/ L）; （三）抗体效价（毫克/升）; （d）OL条件下延长诱导时间的细胞密度和抗体效价。; 3.6 在甲醇补料阶段的代谢过程（a）甲醇限定（ML）（b）氧受限（OL）条件下补料分批巴斯德毕赤酵母的培养。;4结论与分析;AOX1启动子是在ML最活跃下，但OL下不太活跃。 过氧化物酶体的生物合成显示对甲醇的消耗高度依赖。 在碳限制补料流加过程中过氧化物酶体增殖在含葡萄糖的培养基中被抑制 尽管在特定的时间（86 H）AOX1启动子诱导的单克隆抗体的生产力在ML的比OL高（ 0.026比0.020毫克）。但是氧限制条件是一个比较好的流程适用于较长的诱导（ 180小时） 最大量的生产重组蛋白高度依赖甲醇消耗速率;