第3章 沉淀技术方案.pptVIP

现代生化分离技术 Separation Methods in Biochemistry ;第三章 沉淀技术;第一节 概述;3.1.2 沉淀的类型：;沉淀法是最古老的分离和纯化生物物质的方法，目前仍广泛应用在工业上和实验室中。 由于其浓缩作用常大于纯化作用，因而沉淀法通常作为初步分离的一种方法，用于从去除了菌体或细胞碎片的发酵液中沉淀出生物物质，然后再利用色层分离等方法进一步提高其纯度。 沉淀法由于成本低、收率高、浓缩倍数高可达l0-50倍和操作简单等优点，是下游加工过程中应用广泛的值得注意的方法。 缺点：针对复杂体系而言，分离度不高、选择性不强;第二节 沉淀方法的分类;盐析法—蛋白质在水溶液中的溶解度受盐浓度影响;;盐析 （破坏水化膜、中和电荷）;2、加入高浓度中性盐后，盐离子与生物分子表面的带相反电荷的离子基团结合，中和了生物分子表面的电荷，降低了生物分子与水分子之间的相互作用，此时生物分子很容易相互聚集，在溶液中的溶解度降得很低，从而形成沉淀从溶液中析出。;;2、盐析公式及讨论 ;讨论;2、β值的特性及对盐析的影响 ;3、分段盐析;3、盐析操作要点 ;通常采用中性盐，最常用（NH4）2SO4， 优点： 1、溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。 由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。硫铵在0℃时的溶解度70.6g/100mL ，Na2SO4 -4.9,? NaH2PO4 -1.6 ;2、不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的（NH4）2SO4保存可达数年之久。 3、次常用Na2SO4。缺点：在30℃以下溶解度较低，主要用于热稳定蛋白。 ;3.3 盐析的操作与应用;加盐的方法;3.3.2 盐析的影响因素; 不同浓度的蛋白质溶液产生沉淀所要求的临界盐浓度不同。 高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度沉淀，若蛋白质浓度过高，易产生各种蛋白质的共沉淀作用。 低浓度的蛋白质，共沉淀作用小，但回收率降低。较适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％，相当于25 mg/mL～30mg/mL。 ; pH值对盐析的影响;温度的影响 ; 无机盐种类 阴离子盐析作用顺序 柠檬酸盐PO43－SO42－CH3COO－Cl－NO3－SCN－ 阳离子盐析作用顺序（一价） NH4+K+Na＋;3.3.3 沉淀的再溶解;3.3.4 脱盐;有机溶剂沉淀法;;（2）脱水作用;2、影响有机溶剂沉析的因素;（二）样品浓度 ;（三） pH值 ;（四）离子强度 ;3、有机溶剂沉淀法的应用;（二）应用;实例;等电点沉淀法 ;;2、应用 ;;;;;; 其他沉析技术;二、选择性变性沉淀法 ;;;第三节 沉淀技术的应用 ;;;3.3.2 核酸;