第2章 紫外-可见分光光度法方法技巧.pptVIP

光、电、色;分子光谱的分类 分子吸收光谱 转动光谱（远红外光谱） 振动光谱（红外光谱） 电子光谱（紫外-可见光谱） 分子发射光谱 电子光谱（分子荧光、磷光）;色谱法分类 气相色谱法 高效液相色谱法; 紫外-可见分光光度法 (紫外-可见吸收光谱法):物质分子对紫外-可见光的吸收进行定性、定量及结构分析。 紫外-可见光区分为远紫外(10~200nm)、近紫外(200~360nm)和可见部分(360~760nm)；远紫外的吸收测量在真空下进行；通常研究近紫外-可见光范围的光谱行为。;§2－1 分子光谱概述 1．分子光谱产生 M＋hν M* ;吸收光谱(吸收曲线): 横坐标用波长或频率表示；物质的吸收峰位置对应于分子结构，是定性依据。 纵坐标用光强的参数表示，如透光率、吸光度、吸光系数等，是定量依据。;3．光吸收定律：朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律;透光度（透光率或透射比）（T，Transmittance ） ：透过光强度与入射光强度之比 ： T = I / I0 吸光度（A, Absorbance ）：物质对光的吸收程度，其值为透光度的负对数：; 注： Lambert-Beer定律不仅适用于溶液，也适用于均匀的气体和固体状态的吸光物质，是各类吸收光谱法，如红外光谱法和原子吸收光谱法等的定量分析依据。;吸光度A、透光率T与浓度c的关系; ε＝A/bc L·mol-1·cm-1 cm mol·L-1;非单波长入射光引起的偏离 吸光物质在溶液中发生化学变化引起偏离 介质不均匀引起的偏离 ;非单波长入射光引起的偏离 吸收定律仅对单色光的吸收才是正确的。当入射光是非单色光时，将引起定律的偏离。设混合光是双波长。;吸光物质在溶液中发生化学变化引起偏离 ;介质不均匀引起的偏离 Lambert-Beer定律要求吸光物质的溶液均匀。如是胶体溶液、乳浊液或悬浮物质，当入射光通过溶液时，因散射现象而造成损失，使实际测得的吸光度增大，从而偏离Lambert-Beer定律。故紫外-可见吸光光度法一般仅适用于透明溶液。 ;与紫外-可见吸收光谱有关的电子有3种: 形成单键的σ电子, 形成双键的π电子以及未参与成键的n电子 (孤对电子) 根据分子轨道理论，这三种电子的能级高低???序为： （ σ） （ π ） （ n ） （ π＊ ） （ σ＊ ） σ、π：成键分子轨道. n: 非键分子轨道. σ＊、π＊：反键分子轨道;跃迁所需能量次序： σ→σ＊ n→σ＊π→π＊ n→π＊;对于有机化合物, 最有用的 吸收光谱是基于π→π＊和 n→π＊跃迁产生的, 实现这两类跃迁所需要的能量相对较小, 其吸收峰波长一般处于大于200nm的近紫外光区, n→π＊跃迁还可能在可见光区;对于有机化合物来说，分子中哪些基团在吸收辐射后会产生π→π＊和 n→π＊跃迁？;①生色团：能导致在紫外-可见光区产生吸收的基团：含不饱和键和未成对电子。如-C=C-、C=O、-N=O、-N=N-、-C=N等，相应于π→π＊与n→π＊跃迁。 ;②助色团：本身无吸收，但能使生色团吸收强度和波长发生改变的基团：含有孤对电子的基团。如：-OH、-NH2、-SH、-X(卤素）等。孤对电子与生色团中π电子相互作用, 使π→π＊跃迁能量降低并引起吸收峰位移.;③红移、蓝（紫）移、增色效应和减色效应 使最大吸收波长移向长波方向为红移；移向短波方向为蓝移。伴随强度增大或减小为增色效应或减色效应。;3．影响紫外可见光谱的因素 ;影响吸收强度和精细结构 极性溶剂使精细结构消失，典型的例子是对称四嗪在不同溶剂中的吸收光谱;溶剂的选择原则： (a)溶解样品；(b)在样品吸收的范围内无吸收；(c)尽量选用非极性溶剂。; （2）空间效应 分子处于同一平面时，各生色团间的相互作用达到最大，分子的激发能降低，吸收较长波长的光，且强度增大。 ;结构示意图;紫外-可见分光光度计组件; 1．基本组成部件 （1）光源 紫外：氢、氘灯 发射160~375nm的连续光。 可见：钨灯或碘钨灯 发射320~2500nm的连续光。 氙灯适合于紫外和可见部分，发射250~750nm的连续光。;（2）单色器;（3）吸收池 紫外及可见光区：石英比色皿 可见光区：光学玻璃比色皿(吸收紫外光) 注意：不能用手拿光学面；放入试样室时必须用滤纸（或镜头纸）吸干外面的溶液；盛溶液时只装2/3。 （