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bac-to-bac 昆虫杆状病毒表达系统操作手册.pdf 78页

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bac-to-bac 昆虫杆状病毒表达系统操作手册
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® Bac-to-Bac Baculovirus Expression System Version D 6 April 2004 10359 ® Bac-to-Bac Baculovirus Expression System An efficient site-specific transposition system to generate baculovirus for high-level expression of recombinant proteins Catalog nos. 10359-016, 10360-014, 10584-027, 10712-024 tech_service@ ii Table of Contents Kit Contents and Storage v Accessory Products vii Introduction 1 Overview 1 ® The Bac-to-Bac Baculovirus Expression System 3 Experimental Outline 6 Culturing Insect Cells 7 General Guidelines 7 ™ Generating the Recombinant pFastBac Vector 9 General Information 9 Cloning into pFastBac™1 10 Cloning into pFastBac™HT A, B, and C 11 Cloning into pFastBac™ Dual 15 Transformation and Analysis 17 Generating the Recombinant Bacmid 19 Transforming DH10Bac™ E. coli 19 Analyzing Recombinant Bacmid DNA by PCR 23 Producing Recombinant Baculovirus 26 Transfecting Insect Cells 26 Isolating P1 Viral Stock 29 Amplifying Your Baculoviral Stock 31 Performing a Viral Plaque Assay 33 Expressing Your Recombinant Protein 40 Troubleshooting 43 Appendix 49 Recipes 49 Isolating Recombinant Bacmid DNA 51 Map and Features of pFastBac™1 53 Map and Features of pFastBac™HT 55 Map and Features of pFastBac™ Dual 57

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