吸光光度法-物理化学.doc

吸光光度法 教学目的：掌握光度法的基本原理，了解光度分析条件的控制，分光光度法的应用范围。 教学重点：Beer定律；光度分析的应用。 教学难点：光吸收原理；光度分析的准确度。 吸光光度法：基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法和分光光度法。 分光光度法的优点：灵敏、准确、快速、选择性好、适于微量组分的测定。 6.1 概述 6.1.1吸光光度法的特点 1．光的基本性质 紫外光：200-400nm 可见光：400-750nm 红外：0.75-50(m 单色光：单一波长的光。 复合光：由不同波长的光组成的光。 互补色光：按一定比例混合，能够组成白光的两种光互称为互补色光。见p216。 溶液呈现的颜色是它吸收光的互补色。 两互补色按一定比例混合后，可得到白色。 2．吸收光谱产生的原因 由于不同的物质微粒具有不同的量子能级，其能量差也不同，因此物质对光的吸收具有选择性。分子能级图，p215，图6－1。 吸收光谱曲线：A(C曲线。它反映某溶液对不同单色光的吸收程度，在最大吸收波长处测定吸光度，则灵敏度最高。 a.(max与c无关 b. A(c 6.1.2光吸收的基本定律 朗伯－比尔定律 1760年，Lambert用实验指出，当光通过透明介质时，光的减弱程度与光通过介质的光程成正比。1852年，Beer研究证明了，光的吸收程度与透明介质中光所遇到的吸光质点的数目成正比，在溶液中即与吸光质点的浓度成正比。 吸光度： 透光率： 2．摩尔吸收系数和桑德尔灵敏度 （1）摩尔吸收（光）系数( A＝Kbc b：cm c：mol/L A=(bc (:摩尔吸收系数，只与波长有关。单位：L.cm-1.mol-1 物理意义：一定(下，b＝1cm，c＝1 mol/L时的吸光度。 实际工作中不能用c＝1 mol/L的溶液测吸光度(A＝0.2-0.7)。(能反映方法的灵敏度，光度法测定(：104，一般(:105已很灵敏。 （2）桑德尔灵敏度指数：S （(g/cm2） 在(max时，A=0.001下，单位截面积光程内所能检测出来的吸光物质的最低含量。 S与(的关系：A＝0.001＝(bc，bc＝0.001/( S=b(cm)(c(mol/dm3)(M(g/mol)(106(g/g＝((g/cm2) <例>Fe2+与邻二氮菲生成红色络合物，(＝1.1(104 ， 灵敏度高 Fe2+与磺基水杨酸络合物，(＝5.8(103， 双硫腙与Pb的(＝6.8(104，S＝M/(＝207/6.8(104=0.0030((g/cm2) 双硫腙与Cu的(＝4.52(104，S＝M/(＝63.5/4.52(104=0.0014((g/cm2) 灵敏度高 3．吸光度的加和性 共存的多种吸光物质对同一波长光吸收的光度值分别为A1，A2，…An，则总吸光度为： A=A1+A2+…+An （据此可进行多组分的测定） 6.1.3比色法和吸光光度法及其仪器 1.目视比色法：比较透过光的强度 标准色阶：在相同条件下显色，目视比较。 特点：灵敏度高，准确度低，不同人看，结果不同，不符合朗伯－比尔定律也可用目视比色法，因为比较的是透过光。 2.光电比色法：比较溶液对某一波长光的吸收情况。比目视比色法的准确度和选择性好。 3.吸光光度法：与光电比色法的原理相同，只是二者获得单色光的方法不同，前者使用滤光片，后者使用光栅、棱镜，因而比光电比色法的准确度和选择性好。 4.分光光度计及其基本部件：光源－单色器－比色皿（吸收池）－检测器－显示器 （1）光源 钨丝灯：可见、红外 400－1000nm氢灯或氘灯：紫外 160－350nm （2）单色器 滤光片：有机玻璃片或薄膜，利用颜色互补原理。 棱镜：根据物质的折射率与光的波长有关。玻璃棱镜:可见,石英棱镜:紫外、可见 光栅：在玻璃片或金属片上刻划均匀的线，1200条/mm, 衍射、干涉原理 （3）吸收池：玻璃:可见, 石英:紫外、可见 （4）检测器：光电转换器件（光电管、光电倍增光，光电二极管阵列）。利用光电效应，光照产生光电流，测定光电流的大小。 （5）显示器：检流计：72型。数字显示：722型。数字打印：UV－240。 6.2 光度分析法的设计 6.2.1显色反应：将待测组分转化成有色化合物的的反应。M＋L＝ML 1.要求：（1）选择性好；（2）灵敏度高，(>104；（3）有色化合物ML要稳定，不分解； （4）ML的组成要一定（只ML无MLn）；（5）ML与L颜色差别大,吸收峰波长差：((>60nm. 2．显色剂：满足以上要求。有机显色剂 6.2.2显色条件的选择 1.溶液的酸度：M＋L＝