反相离子对色谱法课件.pptVIP

离子对色谱法 发展过程 基本概念 基本原理 发展过程 20世纪60年代初，Schill等人对两个相反电荷的离子相互作用形成一个中性化合物的现象进行了 系统研究，并把它引入到液相色谱中，这是最早的离子对色谱法。20 世纪 70 年代初，发展起来了现代 离子对色谱法，早期的反相离子对色谱主要用于液—液分配色谱（固定液涂渍与载体上）。20世纪70年 代中后期随着化学键和固定相的发展，离子对色谱不再使用涂渍型填料，而使用现在最常用的反相离子 对色谱。离子对色谱主要分为两类：正相离子对色谱和反相离子对色谱。因为正相离子对色谱法现在已 经很少使用，故只介绍反相离子对色谱法 基本概念 离子对色谱法（ion—pair chromatography，IPC）是用正相或反相色谱柱分离离子型化合物和可解 化合物的方法（counterion）与离子化的样品组分形成离子对，这种离子对同中性或非极性分子一样，可 采用分配色谱的方法进行分离。 反相离子对色谱法 反相离子对色谱法是把离子对试剂添加到极性流动相中，被分析的样品离子在流动相中与离子对 试剂（反离子）生成不带电的中性离子对，从而增加了样品离子在非极性固定相中的溶解度，是分离系 数增加，改善分离效果。 基本原理 在阐述离子对色谱的保留机制时，有多种模型理论，主要理论有离子对模型和动态离子交换模型， 本书介绍离子对模型。 离子对模型认为，在反相离子对色谱中，固定相为疏水性的键合相（如ODS），被分离的离子和反 离子同时存在于强机型的流动相中两者生成的中性离子对在流动相和键合相之间进行分配，可采用分配 色谱的方法进行分离 主要原理是在在水溶液流动相中溶质离子X+ 和相反电荷对离子Y- (若X带负电荷，则Y带正电荷）形成离子对[X+ Y- ]，作为中性的缔合物或络合物由于疏水效应转移到非极性有机键合相： [X+ ]m +[Y-]m?[X+Y- ]s 反应平衡常数KXY 也称为萃取常数（因离子对先前已用于离子对萃取），下标m，s指流动相和固定相。 KXY=[X+Y-]s/ [X+ ]m [Y-]m X在两相中的分配系数K为两相中浓度比： K= [X+Y-]s/ [X+ ]m = KXY [Y-]m 色谱过程中溶质的保留值k为 k=KVS /Vm =KXY [Y-]m VS /Vm 影响因素 流动相的 PH 值 合适的 PH 是离子对色谱的重要条件，它将决定离子化合物的解离度为了使化 合物有最大程度的解离，获得合适的保留与响应，但又不能超出硅胶基质的色谱柱所能承受的范围，一 般PH为2~7.5。 分离强酸性药物，在低PH值也能充分解离，故对PH值要求不严；对于弱酸性药物，如磺胺类、 巴比妥类药物等，需在高PH值时才能充分解离，若PH值过低，则抑制解离，样品组分呈不解离溶质， 故这些药物不太适合采用离子对色谱分析。碱性试剂的分析可控制在较低 PH，能在色谱柱适应的范围 内较方便的进行离子对色谱分析。 由酸碱平衡可知，流动相的PH值影响酸碱化合物基离子对化合物的解离。为了使酸碱化合物获得 最大保留， 应选择PH≈ （pKa+2） 的流动相， 使其完全解离为RCOO - 。 对于碱性样品， 应选择PH≈ （pKa-2） 的流动相，使其解离为BH + ，从而是样品离子于离子对试剂形成中性离子对化合物而保留。 离子对试剂的类型 离子对试剂的种类决定于被分离样品的性质，通常选用与被测样品电荷相反的离子对试剂。 对于同一类别的离子对试剂，其碳链长度不同，疏水性也不同。离子对试剂的碳链越长，所形成 的离子对越易在固定相上保留；反之，碳链越短。离子对的保留值越小。 离子对试剂种类不同，其所形成的离子对在固定相上的保留程度也不同： （1）同一类离子对试剂中，亲水性基团（如—OH、—COOH、—NH2）数目越多，形成的离子对 的保留值越小；疏水性基团（如芳基）数目越多，形成的离子对的保留值越大。 （2）对于烷基胺（铵）类离子对试剂，所形成的离子对保留顺序大致为季铵离子伯胺离子仲胺 离子叔胺离子。 （3）对于无机阴离子不同的同一类离子对试剂，所形成的离子对保留顺序为