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食品检验工大肠菌群教案
广东食品药品职业学院教学教案
(2012~2013学年第二学期)
课程名称 实训项目 黄酒中大肠菌群测定
检验工考证简解、单项技能训练 课时 16 教学对象 2013.05 教 材 教学方法 1.了解黄酒中大肠菌群的测定原理。
2.学习并掌握黄酒中大肠菌群的检测方法。
3.巩固微生物接种与分离技术,细菌染色技术。 教学与要求 1培养基的2.供试液的制备。
3.发酵管的接种。
4.分离培养。
5.染色试验等 重点难点 天平、称量纸、匙、pH试纸、量筒、试管、、玻璃棒、烧杯、试管架、棉花、线绳、报纸、灭菌锅1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液)涂片→干燥→固定→初染结晶紫→水洗→媒染卢戈氏碘液lmin)→水洗→脱色95%的乙醇20~30s→水洗→复染红液min)→水洗→晾干→镜检。取洁净无油的载玻片,用接种环挑取2~3环直接涂于载玻片上并涂成膜室温自然干燥。也可以将涂面朝上在酒精灯上方热。滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于涂面上,染色?,倾去染色液,细水冲洗至洗出液为无色,将载玻片上水甩。用卢戈氏碘液媒染约lmin?,水洗。用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管加95%的乙醇脱色20~30s,至玻片流出的乙醇无色时,立即水洗,将载玻片上水甩。革兰氏染色结果是否正确,乙醇脱色是操作的关键环节。在涂片上滴加红液复染约2~3min?,水洗,然后用吸水纸吸干。在染色的过程中,不可使染液干涸甩去玻片上的水自然干燥、电吹风吹干或用吸水纸吸干均可以(注意擦菌)。涂片必须完全干燥后才能油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌(G+),被染成红色的为革兰氏阴性菌(G-)。清洁显微镜。先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹,最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯。染色玻片用洗衣粉水清洗,干后备用。
[板书]五、实验结果与分析(报告)(第五天下午)
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
实验报告记录模板
检品名称: 批号: 规格:
检验日期: 报告日期:
凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌可报告大肠菌群阳性。
接种量
管号
发酵反应结果
有无典型菌落
革兰染色结果
复发酵反应结果
阳性管数统计
1
1
2
3
2
1
2
3
3
1
2
3
根据证实实验结果,查MPN表,结果报告<每100ml(g)10-2稀释级)
a) 用25ml吸量管吸取25ml黄酒(考试用水样)放到装有225ml的生理盐水的锥瓶中混匀,制成10-1的稀释级;
b) 用1ml灭菌吸管吸取10-1稀释液1ml,沿管臂慢慢注入含有9ml的生理盐水的试管里,振摇混匀即得10-2的稀释级 ,注意每递增稀释一次,必须另换1支1mL灭菌吸管;
c)选择三个稀释度(10-1、10-2、10-3),接种乳糖胆盐发酵管(考试时是水),每个稀释度接种三管。每管接种量1ml(乳糖胆盐发酵管10ml+1ml稀释液);
2. 革兰染色镜检:
从老师已经培养好的EMB平板培养物中挑取2-3个菌落进行镜检(做2-3张片)
革兰氏染色法:涂片→干燥→固定→结晶紫初染(50s)→水洗→卢戈碘液媒染(1min)→水洗→95%乙醇脱色(20-30s)→水洗→番红复染(2-3min)→水洗→干燥→镜检(油镜观察)。在油镜头下观察到的结果要让考官看并打分。
3. 结果报告:(用表格来填写)
根据老师提供的已培养好的乳糖胆盐发酵管的情况进行记录,报告。
凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌可报告大肠菌群阳性。
4. 评分标准
考核要素
评分要素
配分
评分标准
取样量
9管3个浓度的选取稀释与样品中和
8分
浓度稀释与中和正确(7-8分)
稀释基本正确(4-6分)
不正确(3分以下)
基本操作
无菌操作
8分
无菌操作正确(6-8分)
基本正确(4-5分)
不正确(3分以下)
染色涂片
10分
正确、熟练、清晰(8-10分)
基本正确、较熟练清晰(5-7分)
不熟练、染色效果较差(4分以下)
显微镜的使用
8分
熟练、正确(7-8分)
基本正确、较熟练(4-6分)
找不到视野(3分以下)
试验结果
试验结果与报告
6分
结果正确、报告清楚(5-6分)
结果不正确(4分以下)
5. 注意事项:大家可以看检验标准,要熟悉整个检验程序,记住操作步骤,注意无菌操作的要求,熟悉吸量管的使用,注意每递增稀释一次,必须另换1支1mL灭菌吸管。
6. 考核结束后
每个同学要把用过的器具洗干净(平板培养物不能洗),同时在大锥瓶装约225ml自来水放回原位;桌面收拾干净。
[板书]七
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