生物化学教程-东北大学生命科学与健康学院.PDFVIP

生物化学实验教程 仲崇斌 崔振波 东北大学 前 言 有识之士早就预言，21 世纪是生命科学的世纪。生物化学作为生命科学各分支理论和 应用学科的基石，受到越来越广泛的重视，成为生命科学中最活跃的分支学科之一；工业、 农业、医药、卫生和环境科学的某些研究也以生物化学理论为依据，以其实验技术为手段。 生物化学实验作为把生物化学理论知识与实践相结合的桥梁，既能加深学生对生物化学理 论的理解和掌握，又能培养学生运用生物化学理论知识去分析问题、解决问题的素质和技 能，在培养学生严谨的科学态度和独立的工作能力方面，有着不可替代的作用。 本书结合我校生物工程专业实验设备的现状以及学科发展的需要，多以植物材料为研 究对象，主要围绕核酸、蛋白质、酶等生物大分子的分离和测定，安排了一系列不同层次 的实验项目。全书分为糖类、核酸、蛋白质、酶等部分，共19 个实验，重点突出了层析、 电泳、比色等常用的生化实验技术。希望通过这些实验使学生比较系统地掌握糖、核酸、 蛋白质等的测定方法，初步掌握几项常用的层析和电泳技术，学会选用正确的方法进行生 物材料中多种物质的分离、提纯、鉴定和定量，为学习有关后续课程和继续深造奠定基础。 本书在《生物化学实验技术》（第一版，2003 ）的基础上，根据近两年来生物化学技 术和方法的发展以及本实验室的具体实验条件对其内容进行了适当的调整和更新，并有针 对性地补充了一些思考题。由于编写和出版很仓促，不足甚至错误在所难免，敬请读者批 评指正。 编 者 2005 年10 月 第一章 糖 类 1 实验一 还原糖和总糖的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法） 1 实验二 可溶性糖的硅胶G 薄层层析4 第二章 核酸6 实验三 离子交换柱层析分离核苷酸错误!未定义书签。 实验四 酵母核糖核酸的提取6 实验五 动物肝脏中DNA 的提取错误!未定义书签。 实验六 DNA 琼脂糖凝胶电泳9 实验七 质粒PBR322 分离、纯化和鉴定 错误!未定义书签。 第三章 蛋白质 13 实验八 氨基酸纤维素薄层层析错误!未定义书签。 实验九 FOLIN-酚法测定蛋白质含量 13 实验十 用DNS 法鉴定蛋白质或多肽的N-端氨基酸 16 实验十一 蛋白质的分离提纯——亲和层析法错误!未定义书签。 实验十二 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定20 植物蛋白质的分子量20 实验十三 凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点错误!未定义书签。 第四章 酶25 实验十四 硝酸还原酶活性的测定25 实验十五 淀粉酶活性的测定错误!未定义书签。 实验十六 凝胶层析法分离提取 1，5-二磷核酮糖羧化酶29 实验十七 碱性磷酸酶的提取和分离及比活力测定错误!未定义书签。 实验十八 碱性磷酸酶米氏常数的测定错误!未定义书签。 实验十九 酸性磷酸脂酶的动力学测定错误!未定义书签。 附 录34 附录一 实验室安全及防护知识34 附录二 一些重要仪器的使用错误!未定义书签。 附录三 实验中的误差来源38 附录四 玻璃仪器的洗涤及各种洗液的配制法40 附录五 植物样品的采取、处理与保存错误!未定义书签。 附录六 试剂的配制及一些常用数据表42 附录七 国际上一些重要的生物化学期刊及手册53 主要参考书57 实验一 还原糖和总糖的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法） 第一章 糖 类 实验一 还原糖和总糖的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法） 一、目的 掌握还原糖和总糖定量测定的基本原理；学习比色定糖法的基本操作；熟悉分光光度 计的使用方法。 二、原理 各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖；利用溶解度不同，可将植物样 品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水 解成