第二十四章 血清学试验技术.pptVIP

第十节 免疫血清学技术 概念： 抗原与抗体在体内或体外均发生特异性结合反应，因为抗体主要来自血清，在体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。 一、 概述 按抗原抗体反应性质不同分为： 凝聚性反应：凝集试验、沉淀反应 标记抗体技术：荧光抗体、酶标抗体、生物素标记抗体、 同位素标记抗体、胶体金标记抗体技术等 有补体参与的反应：补体结合反应、免疫粘附血凝试验 中和反应：病毒中和试验、毒素中和试验 免疫转印（Western Blot）; 1、 血清学反应的一般特点 特异性与交叉性： 特异性：血清学反应具有高度的特异性，如抗猪瘟病毒抗体只能与 猪瘟病毒结合，不能与伪狂犬病病毒结合。 交叉性：两种抗原之间含有共同抗原的时侯，有时也发生交叉反应， 如伤寒沙门氏菌与霍乱沙门氏菌常发生交叉反应。 抗原抗体结合机理： 以非共价键结合：疏水作用、氢键、范德华力、静电引力 结合力（亲和力）：抗原决定簇和抗体结合点之间形成的非共价键的数 量、性质、距离。; ; ; 二、 凝聚性试验 凝集反应: 细菌、红细胞等颗粒状抗原与相应抗血清在电解质存在下, 产生可见的颗粒凝集现象。 直接凝集试验： 颗粒性抗原 玻片法：鸡白痢玻片凝集（定性） 试管法：布氏杆菌试管凝集（定性、定量） 间接凝集试验：可溶性抗原（抗体）+ 载体 间接血凝试验：红细胞 猪瘟间接血凝试验 乳胶凝集试验：聚苯乙烯乳胶微球 猪伪狂犬病乳胶凝集试验 协同凝集试验：葡萄球菌A蛋白 SPA + Ab （IgG） SPA-Ab + Ag SPA-Ab-Ag;; 间接凝集反应;正向间接凝集反应;反向间接凝集反应;间接凝集抑制反应（检测抗原法）; 2. 沉淀试验： 可溶性抗原（毒素、病毒、细菌裂解液）与相应抗体???合, 在电解质存在情况下，产生可见的沉淀物。 （1）环状沉淀反应（定性） 小口径试管中进行，先加已知血清0.1 ml，然后轻轻加入等量抗原，使形成二个界面，数分钟后，二个界面间形成乳白色的沉淀环。 如：炭疽环状沉淀反应 （2）琼脂扩散试验： 琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高温时溶于水，冷却后凝固，形成凝胶，呈多孔结构，充满水分，允许各种抗原抗体分子自由扩散。二者于比例适当处相遇，发生沉淀，形成可见的沉淀带。 包括： 单向单扩散、单向双扩散、双向单扩散、双向双扩散 如：马立克氏病 法氏囊病的诊断;;;;;;抗原性质分析; ;（3）免疫电泳技术 琼脂双扩散与电泳技术结合而成。 包括：免疫电泳 对流免疫电泳 火箭电泳 ;对流免疫电泳;火箭电泳;免疫电泳;; 三、 免疫标记技术 Ab + Ag Ab-Ag （含量低时不可见） 　 荧光素 　　 酶 　　 放射性同位素 生物素-亲和素 SPA 胶体金 标记抗体或抗原，进行抗原抗体反应的一类技术。 用途： 对抗原或抗体进行定性、定量、定位 优点：灵敏度、特异性、精确性、应用范围等远超一般血清学方法。; 免疫标记技术包括