南京农业大学生化教学讲稿蛋白质的重要性质5-4-4.pptVIP

第四节 蛋白质的重要性质;四.蛋白质的重要性质; 所以蛋白质具有胶体性质，如布朗运动、光散射、电泳、不能透过半透膜及具有吸附能力等。利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可用羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质，这个方法称透析（dialysis）。 ;(二)两性解离及等电点?; 蛋白质的等电点（pI）：当某蛋白质在一定的pH的溶液中，所带的正负电荷相等，它在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值叫做该蛋白质的等电点。; 蛋白质受到某些理化因素的影响，其空间结构发生改变，蛋白质的理化性质和生物学功能随之改变或丧失，但未导致蛋白质一级结构的改变，这种现象叫变性作用（denaturation）。 ;生物活性丧失（酶）； 溶解度降低，粘度增大，扩散系数变小（蛋清）； 基团位置改变； 对蛋白酶敏感性增大。;4.蛋白的复性;3.重金属盐 Hg2+、Ag+、Pb+ （与蛋白质中带负电基团形成不易溶解的盐,或改变蛋白质的空间结构） ;(五)蛋白质的颜色反应;2. 酚试剂（Folin-酚试剂）反应 蛋白质分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。这一反应常用来定量测定蛋白质含量。可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定. ;3. 茚三酮反应 由于蛋白质多肽链两端有游离的?-NH2和?-COOH，所以蛋白质也可以和茚三酮发生反应。4. 考马斯亮兰 与蛋白质反应形成蓝色透明物质，在595nm下进行比色。 ;(六)蛋白质的的分离、纯化与鉴定;1.蛋白质分离、纯化的过程和一般原则 ;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;四.蛋白质的重要性质;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;影响迁移率的因素：电位梯度 电流密度 导电性 环境pH （分子电荷） 离子强度 分子的大小、形状 根据电泳的原理和影响因素可以设计不同的电泳方法以达到预期的目的;按分离的原理分：区带电泳 移界电泳 等速电泳 等电聚焦 按有无支持物分：自由电泳 支持物电泳 ;第一代固体介质： 纸，醋酸纤维素薄膜，硅胶等 第二代固体介质： 淀粉，聚丙烯酰胺 （多用于蛋白质）， 琼脂糖（多用于核酸分离） ;聚丙烯酰胺的结构和特点;电泳原理： 1.最主要的特性是蛋白质的带电行为，产生电荷效应 2.分子筛效应 3.分子形状;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;（3）根据蛋白质电荷不同的分离方法 b. 离子交换层析（ion-exchange chromatography） ;2.蛋白质分离纯化的一般方法 ;3.蛋白质分子量的测定方法 ;3.蛋白质分子量的测定方法 ;2.蛋白质分子量的测定方法 ;2.蛋白质分子量的测定方法 ;本章结束