视觉通路_分子.ppt

视网膜中视神经细胞研究的概述;;一、前人研究;1.目的及意义;鸟类的90%视网膜节细胞的投射由中脑视顶盖接受,是非常重要的视觉中枢;从视顶盖中央灰质层经丘脑圆核到大脑外纹体组成的离顶盖通路是鸟类最重要的视觉通路,但目前未见有关家禽脑部重要视觉通路对不同光照刺激引起的c-fos基因表达的报道,鸡脑离顶盖视觉通路对不同强度光刺激的反应有待于进一步研究。;光照对母鸡产蛋性能有较显著影响,进一步探讨光信息对鸡生产性能的影响及作用机理,对养鸡业科学利用光照提高鸡的生产性能有重要意义。本研究利用神经通路追踪法的HRP逆行标记技术,由丘脑圆核注入微量30%HRP标记离顶盖通路,用c-fos法检测该通路对不同光照刺激的反应,为进一步探究光照对母鸡生产性能影响的神经调节机制打下基础。;简要介绍;结果显示, 母鸡离顶盖通路各核团对不同强度的光刺激有不同的反应, SGC 层和ROT 核对30 lx 光照最为敏感, 而SP/ IPS 核对40 lx 光照反应较为明显。 注：1.HRP，辣根过氧化物酶 (horse radish peroxidase，简称HRP) 2.TMB, 3,3,5,5-四甲基联苯胺,为一种色原试剂 ;禽类的视觉系统主要分为2 个平行通路: 离顶盖通路和离丘脑通路, 对于包含鸡在内的眼球侧置的单眼视觉的大多数鸟类来说, 视顶盖接受90% 对侧神经的投射, 是非常重要的视觉中枢 。视顶盖具有明显的由细胞和纤维相间排列构成的分层构造。;从其浅表到深部可区分为分为5 层，分别为：视神经层( Stratum opt icum, SO) 、表面灰质纤维层( St ratum griseum et f ibrosum superf iciale, SGFS, 又分为A - J 层10 个亚层) 、中央灰质层( St ratumg riseum centrale, SGC) 、中央白质层( St ratum albumcentrale, SAC ) 和室周灰质层( St ratum griseumperiventriculare, SGP)。;有研究证明, 视顶盖的视觉传出神经主要从SGC 层投到同侧和对侧丘脑的圆核( Nucleusrotundus, Rt) , 且SGC 不同亚层的细胞投射向圆核的不同部位, 圆核投射到同侧的外纹体( Ectost riatum)。;ECT：外纹体 RT：圆核 SP：顶盖 前下核 IPS：顶盖前间下核 SGC：中央灰质层 ;光照对母鸡产蛋性能有较显著影响,探讨光信息对鸡生产性能的影响及作用机理,对养鸡业科学利用光照提高鸡的生产性能有重要意义。 ;;???验过程;1.2方法;1. HRP的引入 用速眠新将动物麻醉后固定于脑立体定位仪上,向母鸡左侧丘脑圆核缓慢注入0.5 μL30%HRP,维持右眼遮光状态48h。 2. 光照刺激 试验组：右眼眼罩移至左眼, 右下眼睑保持睁开状态, 光照刺激1~ 1.5 h。 对照组：维持右眼遮光。 3. 取材 麻醉，灌流，取左脑 4. 切片 冰冻切片;5. HRP 组织化学显色 TMB 呈色显示HRP 标记神经细胞, 部分中性红轻度复染以显示脑部组织构造。 6. FOS 蛋白免疫组化检测 兔抗鼠C-FOS 为第一抗体进行孵育, 采用链霉卵白素-过氧化物酶连接法(SP法）进行免疫组化染色, DAB显色, 部分用Unna 氏多色性美兰染液轻度复染。 阴性对照: 用0 01 mo l/ L PBS ( pH 7 3) 替代一抗, 进行上述试验。 7. 结果分析 略 ;结果与分析;Fos 样免疫反应 呈棕黄色颗粒, 位于胞核, 复染的切片可见这些核团的神经细胞胞体主要呈三角形、卵圆形和纺锤形。 试验组 左侧离顶盖通路中脑视顶盖SGC 层、SP/ IPS 核和间脑ROT 均见有Fos 样免疫反应阳性神经细胞分布, SP/ IPS 核内分布少些。 对照组少见或未见阳性神经细胞分布, 阴性对照切片未见阳性神经细胞分布。 ;SGC 和SP/ IPS 核内许多Fo s 样免疫反应阳性细胞与相邻切片的HRP 标记细胞重叠, 表明这些细胞是投射向ROT 核的离顶盖通路细胞。 不同强度光照后母鸡脑左侧离顶盖通路不同部位Fo s 样免疫反应阳性神经细胞平均光密度不同。证明不同光照刺激对产生fos蛋白有不同结果;我的总结;离顶盖通路;离顶盖通路;视网膜--视顶盖 鸟类的视顶盖是视觉信息的整合和传递中枢，鸟类的视顶盖虽然仍重要, 但纹状体在许多方面已占统治地位，视顶盖有一对前叶称视叶。 视顶盖--圆核(Rt) 鸟类视顶盖的投射纤维大多投射到同侧的丘脑圆核。主要是从视顶盖的S G C 层的不同