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谢国明 检验系 临床检验仪器学教研室 内 容 1 光的吸收定律 2 紫外-可见分光光度计的基本结构和工作原理； 影响分光光度法准确性的因素； 紫外-可见分光光度计的类型。 第一节、光的吸收定律 光吸收定律的表达式及其含义 朗伯(Lambert) 于1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系： A ∝b 比耳(Beer)于1852年提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系: A ∝ c 二者的结合称为朗伯-比耳定律。 第一节、光的吸收定律 I0：入射光强度; C:溶液浓度(单位mol·L-1); b:液层厚度(通常以cm为单位)I:透射光强度; T:透光度 A:吸光度 k:吸光系数(单位L·mol-1·cm-1). 第一节、光的吸收定律 第一节、光的吸收定律 朗伯-比尔定律的适用条件： 1.入射光为单色光； 2.稀溶液。 第二节 紫外-可见分光光度计 分光光度计:能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。 分析精密度高 测量范围广 分析速度快 样品用量少 第二节 紫外-可见分光光度计 第二节 紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度计：工作波段在200nm～800nm的分光光度计。其中： 200nm～400nm为紫外光区。 400nm～800nm为可见光区。 属于分子吸收光谱仪。 第二节 紫外-可见分光光度计 光源（light source）：提供入射光的装置。 要求: 1.能在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱； 2.有足够的辐射强度并能长时间稳定。 几种常见光源比较 单色器（Monochromator）：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置。 入射狭缝：限制杂散光进入； 色散元件：将复合光分解为 单色光，有棱镜和光栅两种； 准直镜：将来自色散元件的 平行光束聚集在出射狭缝上； 出射狭缝：将固定波长范围 的光射出单色器，可以限制 通带宽度。 吸收池（absorption cell）：是用来盛放被测溶液的器件。在可见光区常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区需用能透紫外线的石英或熔凝石英制作。 同一套吸收池的厚度、透光面的透射、反射、折射应严格保持一致。指纹、油污及池壁上的沉淀物都会影响吸收池的透光性能。 通过改进吸收池的几何形状，可提高“光程/体积比”，即尽可能延长单位体积的光程。常用的有： 微型吸收池（Microdrill absorption cell）：“光程/体积比”提高了近10倍。 多光路吸收池（Multipie-path absorption cell）：在吸收池壁上装有反射镜，使光线在溶液中经多次反射后才离开吸收池，大大增加了有效光程，提高了测定的灵敏度。 检测器：把光信号转换为电信号的装置。 对检测器的要求： 1.产生的电信号与照射到它上面的光强有恒定的函数关系； 2.波长响应范围大； 3.灵敏度高； 4.响应速度快，一般要求小于10-8s； 5.产生的电信号易于检测、放大，噪声低。 检测器工作原理 光照射在某些金属表面，会有光电子从金属表面逸出，这种光电效应称为外光电效应。利用外光电效应可以制成光电管和光电倍增管。 光深入到物体内部，将物体内部原子中的一部分束缚电子激发成自由电子，但这些电子并不逸出物体，而是留在物体内部从而使物体导电性增强，称为内光电效应。利用内光电效应可制成光敏电阻、光敏二极管以及光电池。 几种常用检测器比较 信号显示系统: 是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。 二、影响分光光度法准确性的因素 单色性不纯的影响 杂散光的影响 吸收池的影响 电压、检测器负高压波动的影响 其它因素的影响 二、影响分光光度法准确性的因素 （一）单色性不纯的影响 光的吸收定律只是在入射光为单色光的条件下成立，而通常所指的单色光是指有一定谱带宽度的光谱。由于单色器的类型和质量不同，得到的单色光纯度不同，加上使用中狭缝宽度调节不当，都可造成入射光的单色性不纯。从而使仪器读数不准，造成测量误差。 二、影响分光光度法