第六章 样品检测.pptVIP

第六章 农药残留测定方法 第六章 农药残留测定方法 毛细管柱内流动相流速低，流量小，组分会因柱后死体积突然增加而发生严重的纵向扩散，从而导致峰形展宽，有可能使在柱中以分离的组分在柱后再次重叠，影响分离。 也可在使用FID时受阻于引入的H2压力而出柱困难。 增加尾吹气将改善这一状况。 岛津 SPD-10AVP 可进行X-LC极限超高压快速液相色谱和常规液相色谱的分析应用 二、流动相的基本要求 保持色谱柱的稳定性，因而与固定相不互溶（延长柱寿命） 不发生不可逆吸附 有合适的pH值 化学惰性—不与样品及固定相发生反应。 UV：在紫外线区“透明” 示差：折射率与溶剂有较大差异 电化学检测器：电惰性。 对样品有很强的溶解力。 清洗与更换方便 低价、毒性小、纯度高。 2. 流动相的选择 有合适的理化性质（沸点、粘度等，尽可能小一些） 合适的强度（分配系数要合适，简单样品可大，复杂样品要小） 混合溶剂（有等度和梯度之分） 极性合适（需根据溶剂的性质而定） 3、 流动相的物理参数 溶解度参数（溶剂极性的量度）：与样品分配比有关，要适中。 沸点：要低些，便于回收分离样品。 粘度：柱效与粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP。 混合溶剂一般能降低粘度。 4、 混合溶剂 可靠改变溶剂组成来调节溶剂的强度等，以适合不容的样品。 等度淋洗：淋洗过程中溶剂组成不变，强度恒定。 梯度淋洗：淋洗过程中溶剂组成随时间而变，一般使强度按程序增加，使组分在最合适的k值处洗出。 5、梯度淋洗 使用于极性范围宽的混合物的分离。 优点： 提供限单位时间内的最大分离度。 提高出峰的对称性 减小峰宽 降低检测 5、梯度淋洗 问题： 要用高纯试剂（贵）。 可能在固定相上产生杂质富集，需再生处理（尤其是极性柱），可用10 ～ 30倍柱体积的溶剂淋洗。 （一）、防止堵塞 （一）、防止堵塞 （一）、防止堵塞 5．要防止反冲（流动相逆向流动），否则使固定相层位移，柱效下降。 6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范围内的水溶液流动相中：2pH8.5。为了长期保存，最好用纯有机溶剂（如甲醇）清洗柱子。 7．一定要防止柱子干涸，特别是硬胶柱。 二、液相色谱柱的保养 8．使用卫柱(Guard Column,亦称预柱)。连续注射含有强滞留(不被洗脱)组分的样品，将使柱效下降，保留值改变，选择性变坏，柱寿命缩短。为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱之间加上卫柱。 二、液相色谱柱的保养 卫柱较短(5~10cm)，固定相与分析柱类似。其作用是吸着强滞留的组分，防止对分析柱的污染，保持分析柱性能稳定。实验表明，只要卫柱与高效、小粒度分析柱联用，除了使k’为零的组分的塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。 色谱峰的测量 重叠峰在测量上有困难，可用计算机方法进行拟合 步骤5：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。柱连接端的拆卸或重装会导致柱效下降（有效塔板数下降和不对称峰）若步骤5 不能降低柱压，至步骤6 步骤6：若进口端的填料发生堵塞，柱子将不可能被彻底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料，重新填充进行有限的柱效恢复。（2~5mm） 6、柱堵塞的修复 五、FL2200型 液相色谱仪 1、高压输液泵 2、高压进样阀 3、液相色谱柱 4、紫外检测器 5、溶剂箱 1、高压输液泵输液系统 一、GC与HPLC的比较 1、适用于所选的检测器 三、液相色谱柱的保养 柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。 1、必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相（如缓冲液）中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。 2、在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。 三、检测器 三、检测器 紫 外 检 测 器 UV-DETECTOR 二 极 管 阵 列 检 测 器 DIODE ARRAY DETECTOR 四、液相色谱仪的使用 1、流动相 （1）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。 @ 所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。 （2）高纯度。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”