细胞生物学研究方法长沙医学院.doc

长 沙 医 学 院 教 案 课程名称 细胞生物学 授课题目（章节或主题） 授课教师 黄秋霞 所属系（部） 基础医学系 所属教研室 生物技术 职 称 助教 授课时间 年 月 日 第 周 星期第节第 次课 授课时数 授课班级 生物技术 专业（本科） 级 班 教学课型 理论课 教材名称、作者、出版社及出版时间 细胞生物学、翟中和主编、高等教育出版社、2007.8 教学目的要求： 重点与难点： 重点：理解与掌握一些基本的细胞生物学研究方法，并在此基础上能够使各种技术巧妙的结合难点：普通复式光学显微镜构造原理；荧光显微镜的构造原理；电子显微镜的基本构造；电子显微镜与光学显微镜的基本区别；原代细胞与传代细胞的概念。 教学方法（请打√选择）： 讲授法√ 讨论法□启发式√ 自学辅导法□ 练习法(习题或操作) 读书指导法√ ＰＢＬ（以问题为中心的教学法）□其他□ 教学手段（请打√选择）： 板书√ 实物□ 标本□ 挂图□ 模型□ 投影√ 幻灯□录像□ CAI（计算机辅助教学）√ 教学过程设计和教学内容：照明系统:光源、折光镜和聚光镜，有时附加滤光片控制光的波长。 光学放大系统:目镜和物镜组成。 机械装置指分辨物体最小间隔的能力。 ?光学显微镜的分辨力 R=0.61λ/N．A． –其中λ为入射光线波长； N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像4、显微镜的几个光学特点： 介质折射率越接近镜头玻璃的（ 1. 7 ）越好。 sin α /2的最大值小于1；油镜介质为香柏油，镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有效倍数为1000X。光镜样本制作样品→ 固定→ 包埋→ 切片→ 染色（如伊红和美蓝能与蛋白质结合；品红能与DNA结合）把透过标本的可见光的光程差或相位差转换成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见利用两组平面偏振光的干涉，加强影像的明暗效果，能显示结构的三维立体投影。标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。可用于观察活细胞。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器光源为短波光；有两个特殊的滤光片；照明方式通常为落射式观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。直接荧光标记技术用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描,形成立体图像，可重构样品的三维结构。分辨力是普通光学显微镜的3倍。用途类似荧光显微镜，但可以排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率显示细胞样品的立体结构。以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。用于观察超微结构（小于0.2μm）超薄切片负染技术（Negative staining）冰冻蚀刻 freeze-etching电镜三维重构技术根据量子力学中的隧道效应设计当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系，将扫描过程中电流的变化转换为图像，即可显示出原子水平的凹凸形态三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。属非破坏性测量。是纳米生物学研究领域中的重要工具 小结： 重点知识点回顾 重要概念回顾 思考题 为什么说细胞培养室细胞生物学研究的最基本技术之一？ 此列为提示栏（包括重点、难点、教学方法、教学手段、更新教学内容、教书育人等） 时间分配 (分钟) 复习思考及作业题布置 授课的创新点： 参考资料（包括辅助教材、参考书、文献等）： 教研室意见：教研室主任签章： 年　　月　　日 课后记（即通过收集教学督导专家、同行和学生的反馈信息，认真整理分析成功的经验和不足之处，在课程结束后填写）