【优选整合】人教版高二生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习（课件） （共10张PPT）.pptx

选修1专题5DNA和蛋白质技术复习 复习要点 1.DNA的粗提取与鉴定 2.PCR技术 3. 血红蛋白的提取和分离 一、DNA的粗提取与鉴定 【知识点讲解】 1.实验原理 (1)DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 溶解规律 2mol/LNaC溶液 0.14mol/LNaCl溶液 DNA 蛋白质 溶解 析出 NaCl溶液物质的量浓度从2 mol/L逐渐降低的过程中，溶解度逐渐增大 部分发生盐析沉淀 溶解 (2)DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。 (3)DNA与二苯胺沸水浴加热，呈蓝色。 2.操作流程 （1）材料选取： 选用DNA含量相对较高的生物组织。 （2）破碎细胞 鸡血细胞→加蒸馏水→用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液 （3）去除杂质： 利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 （4）DNA析出： 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液 （5）DNA的鉴定： 在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合均匀后将试管置于沸水中加热5 min，溶液变成蓝色 【例题讲解】 “DNA的粗提取与鉴定”实验中，操作正确的是(　　) A.取制备好的鸡血细胞液5～10 mL注入烧杯中，迅速加入物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液20 mL，同时用玻璃棒沿同一方向快速搅拌5 min，可使血细胞破裂，释放出DNA B.整个DNA提取过程中，两次加蒸馏水的目的都是为了降低溶液中NaCl的浓度，使DNA分子的溶解度达到最低，析出DNA分子 C.整个DNA提取操作中，两次加入2 mol/L的NaCl溶液，目的都是使DNA尽可能多地溶解在NaCl溶液中 D.DNA鉴定操作中，只要向溶有DNA的NaCl溶液中加入4 mL的二苯胺试剂，即可出现蓝色 C 【方法点拨】 1.加入蒸馏水是红细胞破裂提取DNA 2.使用两次蒸馏水，第一次是使血细胞吸水涨破，释放DNA，第二次是用来稀释NaCl溶液，使DNA析出 3.DNA遇二苯胺试剂呈蓝色需在沸水浴条件下完成。 二、PCR技术 【知识点讲解】 1．原理 DNA热变性原理 2.条件 在一定的缓冲溶液中提供DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时控制温度使DNA复制在体外反复进行。 3．过程 (1)变性： 温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为单链 (2)复性： 温度下降到55℃左右时，两种引物与两条单链DNA结合 (3)延伸： 温度上升到72℃左右时，四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA链 4.结果 两引物间固定长度的DNA序列呈指数扩增(即2n) 【例题讲解】 多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历30多次下述循环：95 ℃条件下使模板DNA变性、解链→55℃条件下复性(引物与DNA模板链结合)→72 ℃条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是(　　) A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高 C 【方法点拨】 1.DNA变性在细胞内利用解旋酶，细胞外利用高温 2.合成DNA原料为脱氧核苷酸 三、血红蛋白的提取和分离 【知识点讲解】 1．方法及原理 (1)常用方法 方法 原理 凝胶色谱法 电泳法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 分子带电性质的差异、本身大小、形状的不同 （2）凝胶色谱法分离蛋白质的原理 项目 相对分子量大蛋白质 相对分子量小蛋白质 凝胶内部 经过路程 洗脱次序 不能进入 能进入 较短 较长 先流出 后流出 2.提取和分离过程 （1）样品处理： 红细胞洗涤→血红蛋白释放→分离血红蛋白溶液→透析 （2）粗分离： 用透析法除去血红蛋白溶液中相对分子质量较小的杂质 （3）纯化： 用凝胶色谱法分离相对分子质量不同的蛋白质 （4）纯度鉴定： 用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法来测定蛋白质的纯度 【方法点拨】血红蛋白的提取与分离实验的易错点 ①红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。 ②凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 ③色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。 ④色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。 【例题讲解】 以下关于血红蛋白提取