细支气管肺泡癌的分子生物学研究-临床医学专业论文.docx

英文缩略语AbbreviationBACbronchioloalveolarcarcinoma细支气管肺泡癌DAB3,3-diaminobenzidine3,3’．二氨基联苯胺DAPI4’．6一diamidino一2一phenylindole4’，6一二脒基一2一苯基nJlW1朵DISHDNAinsituhybridizationDNA探针原位杂交EGFRepidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子受体FISHfluorescentinsituhybridization荧光原位杂交HEhematoxylinandeosin苏木精与伊红染色HPVhumanpapillomavirus人乳头瘤病毒HRPhorseradishperoxidase辣根过氰化物酶IHCimmunohistochemistry免疫组织化学ISHinsituhybridization原位杂交NSCLCnon—smallcelllungcancer非小细胞肺癌PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应TBSTris。bufferedsalineTris缓冲盐溶液TKItyrosinekinaseinhibitor酪氨酸激酶抑制剂中文摘要研究背景细支气管肺泡癌(BAC)是肺腺痛中的一个亚型，具有单纯细支气管肺泡生长模式，而没有基质、血管或胸膜侵犯的证据。据报道，腺癌伴BAC特征和BAC局灶浸润性腺癌与单纯BAC的预后的相类似，均明显好于其他腺癌患者。近年来一些发达国家的研究资料提示，BAC的发生率呈明显上升趋势。靶向治疗是近年肿瘤学界韵研究热点之一，大型研究显示，对EGFR．TKI敏感的患者倾向于为腺癌或BAC，这使得对该NSCLC亚型，特别是其与EGFR之问关系的研究兴趣有了相当程度的提高。人乳头瘤病毒(HPV)是一类嗜上皮的DNA致瘤病毒。随着分子生物学技术的发展，不断有从肺癌组织中检出HPVDNA相关序列的文献报道。但HPV感染与肺癌发牛的关系，目前说法不一。目的探索BAC分子生物学特点，包括EGFR．TK结构域的突变、EGFR和HER2的基因拷贝数和蛋白表达，探讨它们与BAC的发生发展、治疗反应以及预后的关系，并探讨HPV感染在BAC发生中的作用。方法采用PCR和DNA测序法检测中国人BAC右蜡包埋组织标本EGFR基凶突变情况，PCR和EGFR突变检测试剂盒检测BAC患者外周咖EGFR基因突变情况，荧光原位杂交法(FISH)检测组织标奉中癌细胞的EGFR和HER2基因拷贝数，免疫组织化学法(IHC)检测EGFR和HER2的蛋白表达，PCR和DNA原位杂交法(ISH)检测HPV DNA，实验数据应用SPSSl4．0软件进行统计学分析。结果BAC组织标本中EGFR基因突变牢50％(16／32)，其中7例(占43．8％)为外显子19上的缺失突变，l例(6．2％)为D807N，8(50％)为L858R；EGFR基因突变与性别(p=O．476)、吸烟情况(p=O．414)、病理亚型(p=0．151)和EGFR蛋白表达(p=O．231)没有显著相关性，与EGFR基因拷贝数有非常显著的相关性(p=O．001)。8例外周血EGFR检测中5例(62．5％)检测到EGFR基因突变，包4括G719X 1例，L858R 1例，插入突变1例，T790M 2例。EGFR基因拷贝数增加阳性率41．2％(14／34)，与性别(p=O．681)、吸烟情况(p=0．288)和病理亚型(p=0．056) 没有显著相关性。EGFR蛋白表达阳性率76．5％(26／34)，与性别(p=0．702)、吸炯情况(p=0．724)、病理亚型(p=0．842)和EGFR基因拷贝数(p=0．252)均没有显著相关性。HER2基凶拷贝数增加／基因扩增阳性率5．7％(2／35)，蛋白表达阳性率6．1％(2／34)，均为相同患者，他们的EGFR基因拷贝数增Dii矛D表达办为阳性。PCR扩增检测BAC的HPV 6／1 1、16、1 8型DNA均为阴性，ISH检测BAC的HPV16／18型DNA仅l例(1／24，4．2％)绌胞核内阳性。结论BAC具有较高的对EGFR。TKI敏感性基冈突变率、EGFR基囚拷贝数增加的阳性率和蛋白表达阳性率，以及可能的高水平EGFR／HER2共表达，这可能间接解释了EGFR靶向药物在BAC患者中具有相对较好的治疗效果。通过外周血游离DNA中的EGFR基囚突变检测有可能预测EGFR—TKI对BAC的治疗效果并监测耐药，具有良好的临床应用日，J．景。BAC发生与HPV感染缺乏明显相关性，HPV对BAC的敏癌作用有限。关键词细支气管肿泡癌；表皮牛长因子受体；人乳头瘤病毒英文摘要AbstractBackgroundBronchiol