新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经细胞自噬检测及雷帕霉素对预后的干预研究-儿科学专业论文.docx

苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明 : 所提交的学位论文 是本人在导师的指导下 ，独立 进行研究工作所取得的成果。除文中 已经注明引用的内容外，本论文 不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏 州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作 出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本 声明的法律责任。论文作者签名::1血日期:列川 、oh 、11\F?苏州大学学位论文使用授权 声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， IiP :学位论文著作权归属苏州 大学。本学位 论文电子文档的内容和纸 质论文的内容相一致 。苏州大学有权向 国家图书馆、 中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术 信息研究所〈含万方数据电子出版社〉、 中国学术期刊〈光盘版〉电 子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档， 允许论文被查阅和借阅 ，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文，可以将 学位论文的全部或部分内容编入 有关数 据库进行检索 。涉密论文 口本学位论文属在一一一年一一月解密后适用本规定。 非涉密论文 d论文作者签名 z齐习。日期: -)..Q I小 ob y叮导师签名:九db 日期:I\e-苟 F 矿....F--.........--.丰?一- 二-ι14_ = .吧-阜，==， 二一← .... ........ . ........，、----新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经细胞自噬检测及雷帕霉素对预后的干预 中文摘要目的：研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage，HIBD） 后海马组织中神经元细胞的损伤情况，通过观察不同时间点及各组间细胞死亡、自噬 相关蛋白的表达，初步探讨雷帕霉素对 HIBD 后神经元存活的干预作用。方法：采用 7 日龄新生 SD（Sprague Dawley）大鼠，根据改良 Rice-Vannucci 法 建立 HIBD 模型。将新生大鼠随机分为雷帕霉素干预组（Ra 组）、缺氧缺血组（HIBD 组）及假手术组（Sham 组）。选取 HIBD 模型制成后 0 h、6 h、12 h、24 h、48 h 及 72h 六个时间点，通过 Western blot 法测定海马组织中 Cleaved caspase-3、Beclin-1、 LC3 蛋白浓度的变化；采用免疫组织化学法染色观察海马组织 Cleaved caspase-3 染色 情况，结合 HE 染色及尼氏染色从细胞层面了解海马区域神经细胞发生缺氧缺血损伤 后的转归情况，并探讨应用自噬激动剂雷帕霉素对其发挥的干预作用及可能机制。结果：1、HE 染色结果：1.1 Sham 组脑组织海马区域 6 个时间点 HE 染色后光镜下观察：海马区域组织染 色均匀、结构清晰，神经细胞形态正常，胞质染色为淡红色，胞核染色为蓝色；1.2 HIBD 组脑组织 HE 染色后光镜下观察：缺氧缺血侧海马神经细胞变性及坏死 的程度随时间的延长而加重，表现为海马区域组织结构紊乱、间质水肿，神经细胞肿 胀甚至坏死，胞核出现深染、固缩、碎裂，核仁消失，伴有不同程度的炎性细胞浸润；1.3 Ra 组脑组织 HE 染色后光镜下观察：缺氧缺血侧海马神经细胞出现变性及部 分神经细胞坏死，但程度及范围均较 HIBD 组轻；2、Western-blot 结果：2.1 Beclin-1 蛋白：与 Sham 组相比，HIBD 组该蛋白自 0h 起表达迅速升高，至24h 达高峰，且每个时间点表达均显著高于 Sham 组(P0.05)；与 HIBD 组相比，Ra 组该蛋白表达趋势与 HIBD 组一致，且每个时间点表达均高于 HIBD 组，且具有统计I中文摘要新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经细胞自噬检测及雷帕霉素对预后的干预学意义(P0.05)；2.2 LC3II：与 Sham 组相比，HIBD 组及 Ra 组的该蛋白表达在 6 个时间点的表达 均高于 Sham 组，且具有统计学意义(P0.05)；HIBD 组及 Ra 组该蛋白均从 0h 起开 始上升，且 Ra 组的表达在每个时间点均高于 HIBD 组，除外 12h 这一时间点外，其 它 5 个时间点均有统计学意义(P0.05)；2.3 Cleaved caspase-3 蛋白：与 Sham 组相比，HIBD 组及 Ra 组该蛋白的表达除 0h 无明显增加外，其余 5 个时间点均显著升高，且具有统计学意义(P0.05)；与 HIBD 组相比，Ra 组该蛋白表达在每个时间点均低于 HIBD 组，但只有 6h 及 12h 具有统计 学意义(P0.05)；3、Cleaved caspase-3 蛋白免疫组织化学染色结果：Sham 组海