诊断学 实验诊断 临床基因扩增检验实验室的设置、质量体系的建立及技术验收.pdfVIP

临床基因扩增检验实验室的设置、 质量体系的建立及技术验收 山东省临床检验中心 刘春 80年代以来，以核酸为基础的分子诊断技 术发展很快，特别随着DNA序列分析、分 子合成自动化技术的出现，基因检测技术 已应用到生命科学工农业生产领域，极大 的推动了人类社会的发展，基因扩增技术 在医学领域已广泛应用于微生物学、遗传 学、法医学等多个学科。 临床基因扩增检验实验室的设置 为使基因扩增检验技术有效应用于临床， 更好为疾病的预防、诊断、治疗服务，保 证检验质量，卫生部颁发的《临床基因扩 增检验实验室管理暂行办法》（卫医发 [2002]10号）中对临床基因扩增检验实验室 的分区及设备配置作了明确规定 临床标本的接收 应在四个测定区域之外的地方接收 接收的标本应收集在原始容器中，采用一 次性材料，不能接收从其它检测如生化、 免疫检验等分出来的标本 采集中特别注意污染，防止混入头发、表 皮细胞、痰液 在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人 员将标本带入至标本制备区。并进行有关 记录 什么样的临床基因扩增检验实验室 是最标准的？ 临床基因实验室的设置基本要求 四个区域必须是独立的 各区的仪器设备及物品必须是专用的 各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作 服及鞋帽用 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置 试剂准备区 试剂准备区的仪器设备主要有冰箱、超净 台、加样器、混匀器、天平和离心机等， 加样器、天平除了要专用外，还应有定期 校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的， 试剂制备好后应有质检： 一是否有污染、 二是检测试剂的扩增效果。 标本制备区 标本制备区内的仪器设备主要有生物安全 柜 、加样器、离心机、温育仪、混匀器等。 标本保存、核酸提取、储存及其加至扩增 反应管和测定RNA时cDNA的合成。 标本处理对核酸的扩增有很大影响，必须 使用有效的核酸提取方法。在开展临床标 本前对提取方法进行评价。 标本制备区 标本的制备应在生物安全柜内进行，可防 止气溶胶的扩散。标本制备全过程都应戴 一次性手套，并经常更换，手套污染很容 易导致标本间的交叉污染。处理具有传染 危险性的标本时，最好戴双层手套，当手 套与标本有接触时即可弃掉外层手套 标本制备区 实验时所用的加样吸头必须带滤塞，并注 意滤塞不能是后插入的而是结合在吸头内 壁上疏水性膜滤塞，这样才能有效防止气 溶胶对加样器的污染。 标本制备区 温育既可在加热模块也可在水浴中进行。 加热模块和水浴应在每次使用时，都要对 所设置的温度使用已经校准的温度计进行 校准。 标本制备区内设备都应使用10%次氯酸钠 溶液消毒，然后用水或70% 乙醇去除残留 的次氯酸纳 扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、 微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩 增仪需进行校准。并配备UPS电源，以防 止由于电压的波动，停电对扩增效果的影 响。 扩增反映体系的制备和提取核酸的加入可 在标本制备区也可在本区内进行，关键是 要防止产物的污染 扩增区 加样时，先加提取的核酸模板样本，然后 加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴 性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混 合液的扩增阴性质控。这样做的目的是最 大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。 产物分析区 本区是唯一能打开扩增后反应管的地方。 由于本工作区应设置为负压状态，空气流 向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流 出，故本区可无缓冲间。 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、 加样器和水浴箱等，酶标仪应定期校准， 洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如 加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。 实验室质量管理体系的建立 质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序 质量手册 定义：阐明一个实验室的质量方针，质量 体系与质量工作的文件。 主