色谱柱故障维护与诊断.pptVIP

峰 型 负峰 正常峰 负峰 原因 样品的吸收比流动相的吸收值低 当样品组分通过色谱柱时打破了原来的平衡 用示差检测器时是正常的 * 宽 峰 柱外体积增加 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量 * 柱外体积 Minimize Length and Diameter of Tubing Do Not Volume Overload Injection Use Appropriate Volume Flow Cell E.C.V = V inj. + V tubing + V cell * HPLC使用的接头 无死体积接头 不适用的接头 * HPLC中使用的柱接头 0.090 in. 0.130 in. 0.090 in. 0.170 in. Swagelok Waters Parker Rheodyne Valco Uptight 0.090 in. 0.080 in. Troubleshooting LC Fittings, Part II. J. W. Dolan and P. Upchurch. LC/GC Magazine 6:788 (1988) * 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 柱外体积 10 μL 20 μL Time, min. 2.1 x 150 mm F = 0.2 mL / min. 柱外体积效应的影响 (1ul 进样) * I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 - 样品在流动相中不溶 - 样品组分与固定相不兼容 压力 * I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II. 所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III. 离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) 保留值漂移 * I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 保留值漂移 * 良好的柱使用规范 使用新鲜的水溶液，并考虑使用生物稳定剂（如叠氮化钠） 储存色谱柱时，应冲净缓冲言，并用有机溶剂饱和色谱柱（乙腈） 避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或将接头拧的过紧 完全润湿在运输中变干的色谱柱 对含有保留性较强的杂质组分的样品要进行预处理 定期用强极性的溶剂清洗色谱柱 清除柱填料的局限性 了解溶剂对样品的溶解性及分离的影响 pH 温度 化学兼容性 在使用前过滤溶剂 * 预柱与保护柱 从泵来的流动相 预柱 进样器 保护柱 分析柱 到检测器 预柱对流动相而言 保护柱对色谱柱而言 Stripping or Concentrating Column * Authoring Division Name File Name Security Notice (if required) H 带可重复使用接头及完整保护柱的卡套柱 无保护柱 有保护柱 * 带Techtron保护柱的 Zorbax 卡套柱 带整体过滤片的Techtron 保护柱 * min 5 10 15 20 25 30 35 mAU 140 142.5 145 147.5 150 152.5 155 157.5 160 min 5 10 15 20 25 30 35 mAU 140 142.5 145 147.5 150 152.5 155 157.5 160 BDS ODS Hypersil 250 - 2 mm 有 integrated Guard Column BDS ODS Hypersil 250 - 2 mm 没有 Guard Column 2 mm ID 卡套柱有或无保护柱的比较 * Hi There... * We will start with some more survey results from LC/GC to show some of the most c