细胞培养-final-李翔.pptx

实验汇报细胞培养的相关知识李翔目 录CONTENTS4321细胞培养基本知识细胞培养基本设备细胞培养基本方法细胞培养的应用（举例）1细胞培养基本知识细胞培养细胞培养是指从动物或植物中取出细胞，然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。传代培养将原代培养细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基，叫传代培养，为其提供更多继续生长的空间。原代培养是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质 (即：达到汇合状态) 的培养阶段。1细胞培养基本知识细胞培养细胞培养是指从动物或植物中取出细胞，然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。原代培养传代培养细胞株细胞系3细胞培养基本知识细胞系培养环境细胞形态选择合适的细胞系培养体系成纤维培养基上皮样温度、pH、CO2淋巴母细胞样1细胞培养基本知识基础培养基大多数细胞系均可在基础培养基中生长良好，基础培养基中含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源 (如葡萄糖)，但是这种基础培养基配方中必须添加血清。 细胞系细胞形态培养基是培养环境中最重要的成分，因为它可提供细胞生长所必需的营养素、生长因子和激素，并能调节培养体系的 pH 值和渗透压。早期的细胞培养试验使用天然培养基，由于要对培养条件标准化、提高培养基质量以及需要量的增加，现大多使用人工培养基。目前常用的3种：基础培养基、减血清培养基和无血清培养基。悬浮培养、贴壁培养除造血细胞系和其他一些细胞外，大多数脊椎动物细胞均具有贴壁依赖性，必须在合适的基质上培养，且该基质必须经过特殊处理，以便细胞粘附和伸展 (即：组织培养处理)。但是，许多细胞系也可采用悬浮培养。大多数商品化的昆虫细胞系在单层和悬浮培养体系中均能很好地生长。pH值大多数正常的哺乳动物细胞系都能在 pH 值为 7 .4 的环境中生长良好，而且不同细胞株间差异极小。但是，目前发现有些转化细胞系在轻度偏酸性的环境 (pH 7 .0–7 .4) 中生长较好，而有些正常的成纤维细胞系更适合轻度偏碱性的环境 (pH 7 .4–7 .7)。培养环境CO2值由于培养基的 pH 值取决于溶解态二氧化碳 (CO2) 与碳酸氢盐 (HCO3–) 间的精密平衡，因此空气中CO2含量的变化会改变培养基的 pH 值。为此，使用二氧化碳-碳酸氢盐缓冲盐培养基时必须使用外源性二氧化碳。每种培养基均具有其推荐的二氧化碳压力和碳酸氢盐浓度，以便达到正确的 pH 值和渗透压。减血清培养基减血清培养基是一种补充了营养素和动物来源因子从而降低了血清需要量的基础培养基配方。选择合适的细胞系培养体系成纤维培养基上皮样无血清培养基通过用适当的营养和激素成分代替血清，避免了使用动物血清带来的问题。使用无血清培养基的一大优势是可通过适当的生长因子组合使培养基对特定细胞种类具有选择性。温度、pH、CO2淋巴母细胞样温度细胞培养的最佳温度主要取决于细胞供体的体温。大多数人和哺乳动物细胞系在 36°C 至 37°C 下具有最佳生长状态。1细胞培养基本知识培养细胞的分类成纤维细胞样细胞上皮样细胞淋巴母细胞目 录CONTENTS4321细胞培养基本知识细胞培养基本设备细胞培养基本方法细胞培养的应用（举例）细胞培养基本设备2基本设备细胞培养通风櫉（层流通风櫉或叫生物安全柜）培养箱（湿式CO2培养箱/干式培养箱）水浴锅、离心机、细胞计数器、灭菌器冰箱和冰柜（-20℃）、液氮冷冻柜、倒置显微镜细胞培养基本设备2细胞培养通风櫉I级细胞培养通风櫉II级细胞培养通风櫉III级细胞培养通风櫉水平流通风櫉垂直流通风櫉细胞培养基本设备2细胞培养箱干式培养箱①较为经济②细胞需在密封培养瓶培养③放置水盘可以增加湿度④无法精确控制培养箱内的空气条件细胞培养基本设备2细胞培养箱湿式CO2培养箱①能够准确控制培养条件②可用于培养皿或多孔板中细胞的培养③需要将空气控制在高湿度、高CO2压力的状态④较为昂贵细胞培养基本设备2其他设备目 录CONTENTS4321细胞培养基本知识细胞培养基本设备细胞培养基本方法细胞培养的应用（举例）3细胞培养基本方法维持原则无菌技术维持原则无菌技术无菌操作、无菌试剂盒培养基无菌工作区域传代、贴壁细胞的解离方法细胞传代冷冻与解冻细胞传代冷冻与解冻贴壁细胞的传代悬浮细胞的传代冷冻与解冻的指导原则所需材料细胞培养基本方法3无菌技术试剂区域操作无菌试剂和培养基无菌工作区域无菌操作细胞培养基本方法3维持原则何时传代：1细胞培养基本方法3维持原则贴壁细胞解离：2方法解离作用用途摇落摇晃培养容器，或剧烈吹打疏松贴壁的细胞、有丝分裂细胞刮削细胞刮对蛋白酶敏感的细胞系，可能损伤一