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PCR Array 介绍 1. 什么是PCR Array？ a. 功能分类芯片或PCR 列阵，它结合了实时定量PCR 技术灵敏可靠的优势以及微列 阵技术同时检测多种基因表达量的优势，是分析信号通路或某生物学功能相关基 因表达状态的首选工具。 b. 使用定量PCR 的方法在一张96 孔或384 孔板上同时对某个信号通路或某生物学 功能相关的84 个或370 个重要基因的表达量变化进行检测的。 c. 完全克服了常规杂交芯片假阳性率高及海量数据难于有效分析的缺陷，使用方便， 只要有定量PCR 仪就可以进行该实验，并且赠送配套的数据分析程序。 2. PCR Array 的实验目的？ 主要用于检测某信号通路或某生物学功能相关的一系列重要基因的表达量变化。 3. PCR Array 带来的便利？ a ．即用，免去了复杂的引物设计和实验条件的摸索过程。 b．可以直接了解在某信号通路或某疾病中非常重要的基因，而不需要再检索和阅读 大量的文献和进行前期实验的验证。 c ．实验所得到的数据，可以很方便的进行在线分析，得到的数据分析图可以直接用 于发表的文章。 d ．总之，PCR Array 可以提供准确而可靠的实验数据，并且帮助您节约大量的时间和 精力。 4. PCR Array 的实验流程？ 整个实验流程非常简洁，便于操作。 a ．从样本中提取总RNA。（我们推荐使用QIAGEN 的RNeasy Mini Kits 和RNase Free DNase Set） b．将RNA 反转录为cDNA 。（需要使用与PCR Array 相配套的RT² First Strand Kit） c ．配置PCR 的反应体系。（需要使用与PCR Array 相配套的RT² SYBR Green Master mixes） d ．进行Real-Time PCR 实验。 （需要使用推荐的参数设置） e ．数据分析。 （有免费的分析程序） 5. PCR Array 的质量？ a ．在实验中所需要的每条引物，每种试剂，每个实验条件，每个操作流程，包括每 个plate 的制作都是经过了严格的质检。 b．在我们的网站上，您可以查阅到1000 多篇可举文献，其中包括在Nature、 Science 、PNAS 等高水平杂志上发表的文献。 c ．全球有 1000 多个实验室（包括 300 多个大学）在使用该产品，其中包括：辉瑞， 罗氏，礼来，诺华，拜耳，Harvard，Yale ，Stanford 等。 6. PCR Array 的plate 构成？ A1 至G12 的84 个孔用于检测某信号通路或某生物学功能相关的84 个特异性基因。 H1 至H5 的5 个孔用于检测5 种看家基因，在数据分析时用于校正。H6 孔是基因组 DNA 对照孔(GDC)，用于检测样本中的基因组DNA 污染。 H7 至H9 孔为反转录对照 孔(RTC)，用于检测反转录效率。H10 至H12 孔为阳性对照孔(PPC) 。 7. 为什么需要5 个看家基因？ 通过研究发现并不是所有的看家基因都能在所有的细胞类型，所有的组织，所有的阶 段都有恒定的表达。它们的表达量变化可能会较大，那么只使用一个看家基因作为 内参，可能会导致错误的结论。因此，array 上放置了5 个看家基因，在完成实验以 后，需要从中筛选出若干个真正稳定表达能够起到内参作用的看家基因做为对照。 8. 关于做重复性实验的问题？ 我们推荐使用生物学重复而不是技术性重复。经过验证PCR Array 的重复性非常好， 不同的操作人员使用不同的仪器在不同的时间用同样的样本做同样的Array 得到的结 果重复性非常好。因此我们推荐生物学重复（每个分组中至少3 个或以上的不同样 本），而不推荐生物学重复（不需要每个样本都重复3 次）。另外，plate 上RTC 和 PPC 都是3 个复孔，可以用于检测操作误差。 9. RNA 的用量？ 我们推荐的RNA 的用量是每块96 孔板上一个样本1000ng 的总RNA；每块384 孔板 （4*96 ）上一个样本400ng 的总RNA。 10. PCR Array 是否需要特殊仪器？