实验八 限制性内切酶酶切DNA及分析.pptVIP

实验八 限制性内切酶酶切DNA及分析 实验原理 　　1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA用作基因探针，同人体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为“DNA指纹”。 DNA指纹具有下述特点： １.高度的特异性 ２.稳定的遗传性 ３.体细胞稳定性 DNA指纹图谱法的基本操作： DNA提取(及扩增）； DNA酶切及电泳：经酶切片段琼脂糖凝胶电泳后，按分子量大小分离 ； Southern转移：将琼脂糖凝胶上的DNA带转移至尼龙滤膜上 ； 杂交 ：将已标记的小卫星DNA探针与膜上具有互补碱基序列的DNA片段杂交 ； 放射自显影 ：Ｘ－光片洗片后即可得到杂交图谱（ DNA指纹）。 　　用牛的小卫星探针pBM6.4产生的黄牛DNA指纹图 　　人类DNA指纹。来自犯罪现场的血迹指纹*和7个嫌疑者的血液指纹，其中标本3和犯罪现场的血迹指纹相同。(引自Griffiths, 1999) Restriction Fragment Length PolymorphismRFLP Allele 1 Allele 2 GAATTC GTTAAC GAATTC GTTAAC CTGCAG GAGCTC CGGCAG GCGCTC PstI EcoRI 1 2 3 3 F