发射出比吸收的紫外-可见光波长更长或相等的紫外-可见光荧光通过.PPTVIP

* 分子荧光分析 姓名：龙瑶 学号概述 分子荧光发光的机理 影响荧光发光的因素 定量分析方法 分子荧光分析法在医学检验中的应用 概述 发光分析是受激物质分子或原子以发射辐射的形式释放能量，测量的是物质分子或原子自身发射辐射的强度，属于发射光谱法。 发光分析法包括荧光分析法，磷光分析，原子荧光分光光度法和化学发光分析。 分子吸收了光能而被激发到较高能态，在返回基态时，发射出与吸收光波长相等或不等的辐射，这种现象称为光致发光，分子荧光分析是基于这类光致发光现象而建立起来的分析方法。 分子荧光分析 物质的基态分子受一激发光源的照射，被激发至激发态后，在返回基态时发射出波长与入射光相同或较长的光，称为荧光。一种物质分子能否发射出荧光取决于它本身的分子结构和它所在的环境条件。 通常所指的荧光是指紫外-可见光荧光，即利用某些物质受到紫外-可见光照射后，发射出比吸收的紫外-可见光波长更长或相等的紫外-可见光荧光。通过测定物质分子产生的荧光强度进行分析的方法称为分子荧光分析。 荧光分析可应用于物质的定性及定量，由于物质结构不同，所能吸收的紫外-可见光波长不同，所发射的荧光波长也不同，利用这个性质可鉴别物质。对于同一物质的稀溶液，其产生的荧光强度与浓度呈线性关系，利用这个性质可以进行定量测定。 主要特点 ： 1.灵敏度高 ：检出限为10-4~10-6g/L 。较紫外-可见分光光度法高1~3个数量级。 2.选择性强 ：能吸收光的物质并不一定能产生荧光，且不同物质由于结构不同，虽吸收同一波长的光，但产生的荧光波长也不尽相同 。 3.用样量少、操作简便 。 缺点 : 许多物质本身不会发射荧光 应用不够广泛 分子荧光发光的机理 分子的去活化过程： 当处于基态单重态（S0）的分子吸收波长为λ1和λ2的辐射后,分别被激发到第一激发单重态（S1*）和第二激发单重态(S2*)的任意振动能级上,而后发生以下过程： 振动弛豫: 在溶液中，受激的溶质分子与溶剂分子碰撞，而失去过剩的能量，以10-13~10-11 s的极快速度，降至同一电子态的最低能级上，这一过程属于无辐射跃迁。 内转换: 当两个电子能级非常靠近以致其振动能级有重叠时，如第一激发单重态的较高振动能级与第二激发单重态的某一较低振动能级的位能相同，可发生电子由高电子能级以无辐射跃迁的方式跃迁至低能级上。此过程效率高，速度快，一般只需10-13~10-11s。 荧光发射: 处于激发单重态的最低振动能级的分子，也存在几种可能的去活化过程。若以10-9~10-7s左右的时间发射光量子回到基态的各振动能级，这一过程就有荧光发生。 激发光谱和荧光光谱: 任何荧光物质都具有两个特征光谱，即激发光谱和荧光光谱。 激发光谱:如果将激发光的光源用单色器分光，测定不同波长激发光照射下荧光强度的变化，以激发波长（λ）为横坐标，荧光强度（IF）为纵坐标作图，便可得到荧光物质的激发光谱。 荧光光谱:固定激发光波长和强度，而让物质发出的荧光通过单色器测定不同波长的荧光强度。以荧光的波长（λ）为横坐标，荧光强度（IF）为纵坐标作图，便得荧光光谱。 硫酸奎宁的激发光谱和荧光光谱 蒽的激发光谱和荧光光谱 荧光物质的最大激发波长和最大荧光波长是鉴定物质的根据，也是定量测定时最灵敏的条件。 影响荧光发光的因素 分子结构影响荧光发光 分子产生荧光的条件 ： ①物质必须具有能吸收一定频率紫外光的特定结构； ②物质分子在吸收了一定频率的紫外能之后，必须具有较高的荧光效率，用φF表示: φF=发出荧光的量子数/吸收激发光的量子数 荧光效率越高，荧光的发射强度越大，无辐射跃迁的几率就越小。当荧光效率等于零时就意味着不能发出荧光。因此荧光物质必须具有较大的荧光效率。 1 具有共轭双键体系的分子： 大多数荧光物质都具有芳香环或杂环，因为这些化合物都具有易发生π→π*或n→π*跃迁的电子共轭结构， π电子的非定域性越大，就越容易被激发，分子的荧光效率越大，因此凡能提高π电子共轭程度的结构，如对-苯基化、间-苯基化、乙烯化的作用都会增大荧光的强度。 2 苯环上取代基的类型： 给电子基团。如-OH、-NH2常使荧光增强。 与π电子体系互相作用较小的取代基。如-SO3H对分子荧光影响不明显。 吸电子基团如-COOH、-CO减弱甚至破坏荧光。 3 具有刚性平面结构的分子： 刚性的不饱和的平面结构具有较高的荧光效率，分子刚性及共平面性