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关于合成肽为抗原免疫层析纸条诊断流行性出血热.pdf 4页

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关于合成肽为抗原免疫层析纸条诊断流行性出血热 作者:李经津,陈新文,周宁,李鸿选 【关键词】免疫检测, 关键词: 出血热;肽合成;胶体金;免疫检测 摘 要:目的建立一种以合成肽为抗原的胶体金免疫层析纸条用于检测流行 性出血热患者血清中特异性的IgM,IgG,IgA. 方法 采用戊二醛偶联8 肽到 BSA 上,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记偶联8 肽,组装成免疫层 析试纸条. 结果 胶体金-8 肽免疫层析纸条和流行性出血热患者血清中IgM, IgG,IgA,出现特异性反应,正常人血清未出现阳性反应,和荧光免疫检测结 果比较IgM 符合率为100%,IgA 为89%,IgG 为79%. 结论 以肽作抗原方便无 污染特异性高制作的免疫层析纸条灵敏度高,简便快速,同时可检测 IgM,IgG, IgA,无须特殊设备,有广泛应用前景. Keywords:hemorrhagic fever;peptide synthesis;Colloidal gold;immunoassay Abstract:AIM To develop colloidal gold immunochroma-tography assay paper with synthesizing peptides as antigen used to assay specific IgM,IgA,IgG of HFRS patients in sera.METHODS Eight residual peptides were coupled with BSA using glutaraldehyde.Colloidal gold was prepared with reducing reaction of sodium citrate,and was labeled coupling8residual peptides,was assembled immunochromatography assay papers.RESULTS Colloidal gold- peptides im-munochromatography assay papers could detect the specific serum IgM,IgA,IgG of HFRS,and did not detect any reac-tions in normal sera.The results were highly corresponding with the fluorescent immunosassay.Coresponding with IgM is100%,IgA is89%,IgG is79%respenctively.CONCLU┐SION The antigens using peptides have advantages of con-venience,noncontamination,high specificity.The im-munochromatography assay papers with the8residual pep-tides is a sensitive,simple and rapid method,may syn-chronously detect the IgM, IgG,IgA in HFRS sera. 0 引言 流行性出血热病原体属布尼亚病毒科,汉坦病毒属,有十多个型[1] , 我国仅发现两型,即Ⅰ型(汉滩型,主要由黑线姬鼠携带)和Ⅱ型(汉城型, 主要由褐家鼠携带)[2] .在感染的早期患者血液中就可出现核衣壳抗原特异 性的IgM 抗体,7 病日抗体阳性率为100%,而核衣壳抗原特异性IgG 抗体可维 持10a 左右[3,4] .因此用核衣壳蛋白作抗原是流行性出血热的理想抗原.人 工合成的汉坦病毒核衣壳蛋白8 肽作为抗原,以抗人IgG,IgM,IgA 包被纤维 素膜作为捕获抗体,装配成免疫层析纸条,和荧光免疫检测结果一致,有望成 为快速简便的诊断方法. 1 材料和方法 1.1 材料 8 肽抗原由陕西师范大学李铮博士惠赠;氯金酸购自上海试剂一 厂(RA);硝酸纤维素膜(孔径5.0μ m,PE 支持),玻璃纤维素膜,购自 Whatman 公司;牛血清白蛋白,购自华美公司;羊抗人IgG,IgM,IgA,购自上海 生物制品所,单扩效价分别为 1 80,1 100,1 120,其他试剂购自化玻试剂站, 均为分析纯.流行性出血热阳性血

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