流式细胞仪原理及在急性白血病免疫分型中的应用.pptVIP

FCM急性白血病免疫分型的特点 优点： 高灵敏度的方法测定细胞表面微弱抗原表达。通过多色的标记测定细胞表面、胞浆和核的抗原表达确定不正常的细胞的细胞系、百分比和这群细胞的成熟度。并能结合DNA 倍体和细胞周期分析确定该细胞的恶性度。 缺点： 失去结构上的联系，硬化的骨髓不能产生足够的细胞FCM进行分析。 注： FCM 的样本必须做涂片用于分析不典型细胞， FCM免疫分型每例样本必须结合形态学。 FCM 的表达方式 双参数点正阵图 细胞系特异的单抗 髓系： CD33 CD117 CD13 CD14 cMPO 淋系 T系 CD7/CD3 CD4/CD8 cCD3 B系 CD19 CD10 CD20 cTdT cCD79a NK CD2 CD56 CD16 介绍几个非常有用的单抗 （Not lineage specific） CD34: Stem cell,Blast cell (More primitive leukemias, more commom in B than T ALL) HLA-DR: B Cells, monocyte, myeloid progenitors, activated T cells(Many AML’s not M3,）B-lineage ALL CD16: NK cells, muture granulocyte CD64: Granulocytes and monocytes(Monocytic leukemias bright) CD7: T cells , NK cells, early myeloid cells CD10: Early B cells, mature granulocytes CD45:WBC commom antigen 正常骨髓血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后） 正常骨髓血细胞SSC/CD45 双参数点图 分析SSC/CD45 * 流式细胞仪原理及在急性白血病免疫分型中的应用  复旦大学中美联合分子医学检验中心 单参数直方图 FCM 在白血病免疫分型中影响临 床结果的三个因素  样本的制备（细胞活力60%,1x106）抗体方案的设置（所有细胞系，成熟度抗体，预后指标抗体）FCM的数据分析（最关键，最忌讳只报百分比）  1) ? IgG1/IgG1/CD45/IgG1 2)? HLA-DR/CD117/CD45/CD34 (Myeloid ) 3)? CD14(MY-4)/CD33/CD45/CD64 4) ? CD7/CD10/CD45/CD19 (Lymphocyte) 5) CD16/CD11c/CD45/CD13 6)? CD4/CD8/CD45/CD3 (T cell) 7)? CD16/CD56/CD45/CD2 (NK cell) 8) ? CD103/FMC-7/CD45/CD20 (Hairy cell and Lymphoma) 9)?? CD5/CD23/CD45/CD19 (CLL) 10)?? GlyA/CD71/CD45 (M6) 11)??? CD61/CD41/CD45 (M7) 8)?? IgG(cyt)/IgG(cyt)/CD45 9)???? cTdT/cCD79a/CD45 (Lymphocyte) 10)???? cMPO/cCD3/CD45 (Myeloid) 4 color panel (FITC/PE/ECD/PC5) *