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一个AB型开米拉家系遗传状态的研究_论文.docx
一个AB型开米拉家系遗传状态的研究
作者:杨宝成 喻琼 苏宇清 周丹 金士正 李茜 梁延连 邓志辉
【摘要】 为了研究罕见开米拉血型家系的基因遗传状态,对先证者家系部分样本进行ABO基因序列测定,用流式反向序列特异性寡核苷酸探针方法测定HLAA、B、DRB1基因位点,用PCR序列特异性引物法测定HLAA、B、DRB1基因位点,对16个短串联重复片段位点进行荧光标记复合扩增。结果发现: A3B3型家系的2个体中,ABO基因、HLAB、DRB1基因、多个STR位点出现了2个以上的等位基因。结论: 利用基因分型技术分析开米拉血型能清楚地提示此罕见血型的遗传状态,增进了对此遗传方式的认识。
【关键词】 开米拉血型,ABO, HLA, STR
Abstract In order to study the genetic status of a rare chimeric family, some samples of A3B3 family were identified by sequencing of ABO gene; flowrSSO and PCRSSP were used to detect loci of HLAA,B,DRB1 genes, and multiplex amplifying with fluorescencedye were performed for 16 short tandem repeat (STR) loci. The results indicated that two individuals from A3B3 family contained more than two alleles at ABO gene, HLAB,DRB1 and some STR loci. In conclusion, analysis of chimeric blood group by using genotyping techniques clearly demonstrating genetic status of this rare chimeric blood group promotes further elucidation of the existing state of specific genetic status.
Key words Chimeric blood group, ABO, HLA, STR
开米拉的定义是个体细胞来自两个或多个不同的受精卵。人类血型开米拉可能是遗传性的,也可能是在移植、输血过程中通过输注异源的造血细胞而获得的。先天性开米拉发生在两个受精卵或多个受精卵的胎儿发育中。人类开米拉血型是非常罕见的,常在ABO血型鉴定中存在着混合外观的凝集而引起注意[1-3]。我们实验室在1例ABO亚型的研究中发现其家系存在开米拉现象,现报道如下。
材料和方法
对象
先证者是1名23岁的男性无偿捐血者,他的ABO血清学定为A3B3型,采集到先证者及其弟弟的血液不抗凝血样5 ml。由于先证者父亲去世,未采集到其血液标本。对先证者母亲、哥哥、嫂子及孩子共计4人所采集标本由于条件所限,未能抗凝,只作了ABO血清学血型测定,而未能作进一步分析。本家系个体均为无输血史和移植史的健康个体。
血型血清学检测
血型正反定型按《中国输血技术操作规程》操作进行。其中试剂单克隆抗A、抗B血清(BIOSCOT, Serological Ltd, UK),抗AB血清(Immucor Inc, Norcross, GA30071, USA),抗H植物凝集素(长春博德公司产品),反定型红细胞为本实验室自制。
基因组DNA提取
PUREGENE快速盐析法抽提先证者与弟弟2个样本的基因组DNA,DNA终浓度调节至100 ng/μl,A260/A280在。
ABO基因第6、第7外显子直接序列检测
参照Olsson设计的2对引物[4],5CGGAATTCACTCGCCACTGCCTGGGTCTC3, 5CGGGATCCATGTGGGTGGCACCCTGCCA3,用于扩增ABO基因第6外显子。5GGGCCTAGGCTTCAGTTACTC3,5CGGGATCCCCGTCCGCCTGCCTTGCAG3,用于扩增ABO基因第7外显子,中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2017; 15(2)一个AB型开米拉家系遗传状态的研究引物由上海生物工程所合成。PCR扩增体系包括:每种dNTP 400 μmol/L,Mg2+ μmol/L,Taq酶3 U,模板DNA 500 ng,引物每条 μmol/L,终反应体系50 μl,循环参数为: 95℃
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