实验8 微丝染色及形态观察课件.pptVIP

[目的要求] 1. 掌握微丝的染色方法。 2. 了解光镜下微丝的基本形态结构。 [实验原理] 当细胞用TritonX-100溶液处理，能够溶解质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮蓝（非特异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，微管等蛋白结构在光镜下无法分辨，在光镜下观察到主要是由微丝组成的应力纤维。 应力纤维由平行排列的微丝组成，体外培养的贴壁细胞应力纤维尤为发达，形态长而直，常与细胞长轴平行并贯穿细胞全长。 [实验用品] 器具：CO2恒温培养箱、倒置显微镜、超净工作台、低速离心机、普通光学显微镜、移液器、恒温箱、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸。 材料：盖玻片培养的成纤维细胞 试剂：6 mmol/L PBS（pH 6.5）、1％TritonX-100溶液、M-缓冲液、3％戊二醛固定液、0.2％考马斯亮蓝染液、DMEM培养液。 [实验步骤] 1. 培养 在成纤维细胞进行传代培养时，将已消毒的盖玻片涂上多聚赖氨酸，放入培养皿中，于37℃、5%CO2的温箱中生长24h～48h。 2. 染色处理 （1）取材 取出铺有细胞的盖玻片，放入小培养皿中（正面向上）,用PBS洗3次（从盖玻片一角轻轻滴加3 ? 4滴），洗去表面的培养液。 （2）抽提 吸弃PBS，加入1% T