il27对儿童脓毒症免疫调节作用的初步探讨-preliminary study on immunoregulatory effect of il27 on children with sepsis.docx

IL-27 对儿童脓毒症免疫调节作用的初步探讨中文摘要目的：观察脓毒症患儿疾病早期的免疫状况，了解 IL-27 的免疫调节作用机制，为 IL-27 作为脓毒症治疗新方法提供理论依据。方法：贵州省人民医院 PICU（儿童重症监护病房）2014 年 1 月-2014 年 12 月 收治的脓毒症患儿 20 例，同期我院儿外科择期手术患儿 20 例为对照组，年龄 2岁-13 岁，平均年龄为 7.5 岁。入院后 24 小时内采集静脉血。采用流式细胞术检测外周血 CD14+单核细胞 HLA-DR 表达、CD4+CD25+Treg+细胞比例、IL-27+CD4 细胞比例；Ficoll 密度梯度离心法+免疫磁珠分离外周血 CD4+T 细胞，采用实时 荧光定量 PCR(Real time-PCR)检测 CD4+T 细胞 Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10、 IL-17A、IL-17F、IL-27mRNA 变化；ELISA 法检测血清 IL-4、IFN-γ、TGF-β 蛋 白水平。结果：1、脓毒症早期 CD14+单核细胞 HLA-DR 表达率及细胞因子的改变：（1）脓毒症组 CD14+单核细胞 HLA-DR 表达率(%)：均＞30%，但显著低于 正常对照组（P0.01）。（2）前炎症细胞因子变化：ELISA 检测，脓毒症组 IFN-γ 血浓度显著高于对 照组（P0.01）。荧光定量 PCR 检测：脓毒症组 IL-17A、IL-17F mRNA 表达均 高于对照组（P0.01）。（3）抗炎症细胞因子变化：ELISA 检测，脓毒症组 TGF-β 血浓度低于对照 组（P0.05），IL-4 浓度无显著差异；荧光定量 PCR 检测：脓毒症组 IL-10mRNA 表达明显高于对照组（P0.01）。2、CD4+CD25+Treg+细胞及相关因子的改变（1）流式细胞术检测外周血 Treg 细胞，脓毒症组 Treg 细胞比例显著低于对 照组（P0.01）。（2）荧光定量 PCR 检测 CD4+CD25+Treg+细胞相关因子结果：Foxp3、 CTLA-4、IL-10 基因表达方面，脓毒症组 Foxp3、CTLA-4、IL-10mRNA 表达均 高于对照组（P0.01），GITR 差异无显著性（P＞0.05）。3、IL-27 在脓毒症患儿中高表达：实时荧光定量 PCR 检测脓毒症组患儿CD4+T 细胞高表达 IL-27 基因（P0.01）,同时经流式细胞术检测发现脓毒症组IL-27+CD4+细胞比例显著高于对照组（P0.01）。4、根据 ELISA 法检测所得血清 IFN-γ、IL-4 浓度，得出脓毒症组 IFN-γ/ IL-4比值显著高于对照组（P0.01）。结论：1、儿童脓毒症早期即存在免疫激活与免疫抑制，但以免疫激活占优势。2、IL-27 可能是纠正脓毒症患儿免疫紊乱的新调控因子。关键词：儿童；脓毒症；细胞因子；CD4+CD25+Foxp3 Treg；IL-27Function of IL-27 of immunoregulatory in children with sepsisAbstractObjective: To observe the early immune status in children with sepsis, understand the immunoregulatory mechanism of IL-27 and provide a theory basis of the new therapy for sepsis.Methods: 20 children with sepsis and 20 age-matched children undergoing elective operation in Pediatric Surgery Department were studied. Their ages are between 2 years old to 13 years old, the average age is 7.5 years. CD14+ monocyte HLA-DR expression and proportion of CD4+CD25+ foxp3 regulatory T cells(Treg cells) andIL-27+CD4+ cell were analyzed by flow cytometry. Real-time PCR were used toevaluate the mRNA levels of Foxp3,CTLA-4, GITR, IL-10, L-17A, IL-17F and IL-27 in CD4+cells. Cytokine(IL-4