lamp快速检测日本血吸虫感染性钉螺 卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的分析-rapid detection of pneumocystis carinii and plasmodium falciparum in schistosoma japonicum infected oncomelania by lamp.docxVIP

主要缩略语英文索引缩略语BLAST全称Basic local alignment tool中 文 名 称序列相似性分析工具BPBase pair碱基对CTCholera toxin霍乱毒素DNADeoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸dNTPDeoxyribonucleoside triphosp脱氧核糖核苷三磷酸EBEthidium bromide溴化乙啶EBVELISAEpstein-Barr virusEnzyme linked immunosorbent assayEB 病毒酶联免疫吸附试验JEVJapanese encephalitis virus乙脑病毒HCMVHuman cytomegalovirus巨细胞病毒HIVHuman immunodeficiency virus人类免疫缺陷病毒HPVhuman papillomavirus人乳头瘤病毒LAMPLoop-mediated isothermal Amplification环介导等温扩增LBMLria-bertainmediumMarkerLB 培养基分子量标准品P.CPneumocystis carinii卡氏肺孢子虫P. falciparumPlasmodiumfalciparum恶性疟原虫PCRPolymerase chain reaction聚合酶链反应RPMS.japonicumRevolution per minSchistosoma japonicum每 min 转速日本血吸虫TrisTris-(Hydroxymethyl) aminomethane三羟甲基氨基甲烷LAMP 快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究 硕士研究生：邓鹏程 导 师：杨秋林中 文 摘 要目的利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快 速 检 测 日 本 血 吸 虫 ( Schistosoma japonicum) 感 染 性 钉 螺 、 卡 氏 肺 孢 子 虫（Pneumocystis carinii）、恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）的研究。方法 以日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的特异基因为靶序列， 利 用 PrimerExplorer V3 软件分别设计扩增靶基因的 4 条 LAMP 引物，酚氯仿法分别提 取三种病原体的 DNA，取适量模板 DNA 加入配制并优化好的 LAMP 反应体系，65 ℃下 60 min，完成对靶病原体基因的扩增，通过肉眼观察、SYBR Green I 染色及电泳 来判定扩增结果。LAMP 扩增产物经酶切进一步鉴定；设立对照组评价特异性；10 倍系列稀释模板检测 LAMP 敏感性。结果 模板经 LAMP 扩增后，肉眼、SYBR Green I 染色和电泳均能观察到 LAMP 扩增产物的出现，电泳后呈 LAMP 特征性梯状条带，对照组均无扩增产物； 三种病原体 LAMP 扩增产物经相应限制性内切酶酶切鉴定正确； 结果显示三种病原 体 LAMP 检测方法特异；LAMP 可检测到日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫 的敏感性分别是 1pgDNA/μL，1pgDNA/μl，1.5 个疟原虫/107RBC ，高于或与 PCR 敏感性相当。结论建立了日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫特异、敏感和快速的LAMP 检测方法。关键词环介导等温扩增；检测；日本血吸虫；卡氏肺孢子虫；恶性疟原虫Rapid detection of Schistosoma japonicum, Pneumocystis carinii and Plasmodium falciparum with Loop-Mediated Isothermal AmplificationABSTRACTObjective: To develop the LAMP for rapid detecting Schistosoma japonicum,Pneumocystis carinii and Plasmodium falciparum respectively.Methods: Four primers were designed to target gene by Primer Explorer V3. The DNA of Schistosoma japonicum, Pneumocystis carinii and Plasmodium falciparumwas ex tract ed respectively by ph enol -chl orofo rm ex traction . Th e app rop ri at e amo